滇池噬藻体的分离纯化及蓝藻和噬藻体psbA基因多样性的初步研究

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滇池素有“高原明珠”之称,是中国西南地区最大的淡水湖泊。由于生活污水、工业废水、农业废水等未经有效处理排入滇池,导致滇池严重污染,多年为富营养化水平,每年严重爆发蓝藻水华,给周边居民的生活生产带来了很大的影响。蓝藻水华的治理已成为备受关注的水环境问题,噬藻体是一类特异性感染蓝藻的浮游病毒,其在水体中具有重要生态功能,对水华蓝藻具有较高致死率而成为蓝藻水华控制的潜在生物因子。目前国内有关淡水湖泊噬藻体的研究较少,本研究以富营养化湖泊滇池为研究对象,定时定点采集滇池水样,检测滇池水环境参数,对滇池中的噬藻体进行了分离纯化,同时对滇池水中蓝藻、噬藻体的psbA基因进行分子扩增和测序,评价分析滇池中蓝藻、噬藻体的psbA基因多样性。首先,对滇池水样进行水温、透明度、PH、高锰酸盐指数、总氮、总磷、叶绿素a等环境指标进行连续两年检测。研究表明,2013年海埂综合营养状态指数平均值为52.7为轻度富营养,草海为53.1为轻度富营养。2014年海埂综合营养状态指数平均值为49.2为轻度富营养,草海为46.9为轻度富营养。海埂两年平均为51为轻度富营养,草海两年平均为50为轻度富营养。海埂在2014年总体富营养化程度低于2013年,可能与2014年降雨量增加,滇池大换水等因素有关,同时也在一定程度上反应出滇池在治污上取得了初步成效。滇池蓝藻生物量与PH、总磷极显著正相关,与透明度极显著负相关,与水温、高锰酸盐指数显著正相关,与总氮无相关。其次,对滇池水样进行噬藻体分离纯化,通过宿主筛选的黄化试验,三次重复双层平板法等试验,可能得到专一感染鲍氏织线藻(Plectonema boryanumFACHB-402)且裂解性较强的噬藻体“P”。通过显微镜观察及噬藻体DNA的PCR扩增,进一步证实了噬藻体“P”的存在。通过感染试验证实了噬藻体的裂解时间与宿主体积有关。噬藻“P”体随宿主量增大,裂解蓝藻需要的时间延长。最后,对滇池水样中蓝藻和噬藻体的DNA进行提取,并对蓝藻和噬藻体的光合作用基因psbA进行PCR分子扩增,对蓝藻的序列测序,构建系统进化树,分析滇池蓝藻光合作用基因多样性。获得蓝藻有效DNA序列59条,归属于微囊藻属、聚球藻属、小球藻属三个属,证实滇池中蓝藻具有丰富的遗传多样性,滇池中的优势藻为微囊藻属,不同季节上发现,夏季藻多样性小于冬季。
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