福寿螺雌激素受体基因的克隆及表达分析

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福寿螺原产于南美洲亚马逊河流域,目前已侵入我国在内的许多亚洲国家。2000年世界自然保护联盟将其列为恶性外来物种之一。福寿螺不仅危害农作物等水生作物,而且还传播广州管圆线虫病等。本文首次利用RACE技术克隆到福寿螺雌激素受体cDNA全长,并且探究ER在福寿螺的组织分布、卵巢发育不同阶段的表达量以及在不同外源激素作用下精巢、卵巢中ER的表达量。主要结果如下:(1)ER的分子特征根据亲缘关系较近物种的ER的保守区域设计引物,通过克隆测序拼接后获得cDNA全长序列,共1636bp,包括5′UTR128bp,3′UTR101bp。开放阅读框长1407bp,编码468个氨基酸,其中编码区GC含量为50.68%,等电点为7.40,分子量为51.1KD,亲水性氨基酸含量为67.32%,没有检测到信号肽序列和跨膜肽段结构。(2)ER的组织分布通过实时荧光定量PCR方法研究福寿螺ER的组织分布。结果显示:ER在福寿螺精巢、卵巢、头、肝脏、足、触角、胃、鳃、肌肉和蛋白腺中都有表达,并且在头、肝脏、精巢、卵巢和蛋白腺等这些生殖轴组织中的表达量相对较高。(3)ER在卵巢发育过程中的表达通过实时荧光定量PCR研究在卵巢发育过程中ER的表达情况,检测到在福寿螺卵巢发育的各个阶段都存在特异性表达。在卵巢发育过程中,ER的表达呈先上升后下降趋势,在成熟期时到达最高值,休止期时到达最低值,其中,成熟期时的ER的表达量与其他时期的表达量之间都存在显著差异,排放期和增殖期、休止期之间亦存在显著差异。(4)外源激素处理下ER的表达通过实时荧光定量PCR研究在外源激素作用下ER的表达情况,从整体来看,高浓度雌二醇可以促进ER的表达,并且在作用第三天表达量达到最高;不同浓度的他莫昔酚都可以抑制ER的表达,并且抑制雄性福寿螺的效果更加显著。本论文的研究结果为进一步阐明福寿螺等腹足类的生殖发育调控机制,理解固醇类外源激素对软体动物性成熟的影响奠定基础,同时也为福寿螺的生殖调控提供一定的理论依据。
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