【摘 要】
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20世纪末，病毒全基因组测序、生物信息学分析、蛋白质组学和DNA芯片技术的发展为病毒研究领域带来了前所未有的变革。应用生物信息学数据库和工具，可对现有的流感病毒序列进化
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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20世纪末，病毒全基因组测序、生物信息学分析、蛋白质组学和DNA芯片技术的发展为病毒研究领域带来了前所未有的变革。应用生物信息学数据库和工具，可对现有的流感病毒序列进化规律进行研究。通过对病毒序列的分析，可以预测病毒的关键抗原位点或病毒突破宿主障碍的关键氨基酸残基的变化。从而为传统方法无法取得成功的疫苗研究带来了希望。同时也可对病毒进化过程中宿主障碍突破可能带来的大流行提供预测和有力争取预警时间。流感病毒疫苗生产现在存在许多需要改进的方面，比如使用鸡胚生产流感疫苗的不利于应对大规模流感爆发等问题。Vero细胞是WHO生产疫苗指定细胞，能够利用生物反应器进行大规模培养，在流感疫苗生产上有着广阔的应用前景。但Vero细胞不是流感病毒的天然易感细胞，因此建立流感病毒Vero细胞适应株的基因组并通过反向遗传学技术制备生产毒株对于流感疫苗的生产具有重要意义。本试验使用流感病毒Vero细胞适应株A/kunmin/1/2005va，设计带有Esp3I或Ecol31I酶切位点的引物，用RT-PCR扩增A/kunming/1/2005va的8个基因全长片段，通过点突变将PB2基因中的两个Ecol31I位点突变后将这八个基因片段分别连接至双向表达载体PHW2000上，从而构建了流感病毒Vero细胞适应株的基因组，为遗传重配生产在Vero细胞上高产的流感病毒提供了可供选择的基因库。接着通过将A/Kunming/1/2005与A/kunming/1/2005va基因及编码蛋白序列的比对，提供了病毒进化的理论依据，对改造流感病毒以便于生产高产量和可在Vero细胞基质上生产流感疫苗提供了理论指导。
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