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干扰素α(IFN-α)是细胞先天防御病毒侵染的第一道防线,其对各种类型细胞的功能都有广泛的影响。近些年来,动物IFN的研究主要集中于经济动物,并取得了一定进展,目前市场上商品化的鸡、犬、猪重组IFN产品已应用于实践。然而,迄今为止,鸽IFN-α的抗病毒反应信息以及机制特点还没有被报道。在过去的几十年里,鸽子的数量在欧洲的许多国家成指数增长,其密度已经超过了2000只/km2。由于许多病毒是在鸽子的呼吸道和胃肠道中复制,所以在集约化养殖中病毒更容易通过粪口或气溶胶传播。然而,在一定程度上由于鸽的免疫耐受性、病毒的高突变率和感染宿主的因素,疫苗对某些病毒的控制还未取得完全的成功。此外,由于禽类养殖行业的病毒性疾病的问题日益严重,所以人们越来越侧重于对禽类IFN-α的研究。因此,对鸽IFN-α的特征和相关信号通路的明确可以避免鸽养殖产业的经济利益损失。 在本研究中,克隆了723bp鸽IFN-α的ORF区,编码240个氨基酸。与哺乳动物IFN-α的同源性小于40%,与禽IFN-α基因的同源性在54~80%之间,其中与丹顶鹤的亲缘关系最近,同源性高达79.49%。鸽IFN-α成熟肽亚克隆到原核表达载体pET32a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。经SDS-PAGE电泳分析,原核表达的鸽IFN-α成熟肽融合蛋白主要以包涵体的形式存在,大小约43KDa。重组鸽IFN-α可以抑制水泡性口炎病毒(VSV)的复制,其生物活性最高时达到5.5×105U/mg。此外,胰酶处理后,鸽IFN-α失去原有的抗病毒活性,然而在酸碱、低高温处理后,其活性仍是稳定状态。鸽IFN-α可以通过激活STAT/Jak和PI3K-AKT-mTORC通路,以此来抑制VSV诱发的凋亡现象。尽管在预孵育鸽IFN-α后,p53的表达水平进一步上升,但是鸡胚成纤维细胞并没有发生凋亡。值得注意的是,虽然STAT信号通路被有效的激活,但是p53敲低后却是抑制鸽IFN-α的抗病毒活性,减少抗病毒蛋白Mx1的表达水平,不过并没有减弱Jak的磷酸化作用。此外p53敲低后,VSV表现出加剧凋亡信号通路并且诱导了cleaved-Mdm2的蛋白表达。总之,p53在鸽IFN-α抗病毒过程中可能发挥一种高度互联调节剂的作用。有趣的发现是在病毒侵染中,cleaved-Mdm2可能作为一个主要负调控器而绑定p53。本研究不仅丰富了鸽IFN-α抗病毒特性特点,并且有助于解释p53增强鸽IFN-α抗病毒的根本原因。 通过本研究,首次获得了鸽IFN-α基因,在大肠杆菌表达相应蛋白,并证明在对VSV的抑制率强于鸡IFN-α。此外从自噬和凋亡方面来探究p53在鸽干扰素α抗病毒的作用。实验数据说明:(1)鸽IFN-α可以保护病毒诱导的细胞凋亡;(2)鸽IFN-α在抗病毒过程中是通过激活PI3K/AKT/mTORC通路来诱导自噬;(3)p53的敲低可以抑制鸽IFN-α抗病毒反应;(4)在p53被抑制表达的情况下,cleaved-Mdm2可能起到积极调解鸽IFN-α抗病毒功能的作用。