【摘 要】
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将人TNFβ N端缺失23个aa的基因序列插入表达载体pRSET C,使目的基因置于该载体的多聚组氨酸序列和肠激酶酶切们点序列的下游,在T7噬菌体启动子控制下,经IPTG诱导,rhTNFβ
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将人TNFβ N端缺失23个aa的基因序列插入表达载体pRSET C,使目的基因置于该载体的多聚组氨酸序列和肠激酶酶切们点序列的下游,在T7噬菌体启动子控制下,经IPTG诱导,rhTNFβ融合蛋白在大肠杆菌获得了表达.SDS-PAGE和薄层扫描分析表明约21Kd的rhTNFβ融合蛋白得到高效表达,表达 产物可达细菌总蛋白的18-26%.表达菌体经超声破碎,高速离心,上清经0.45μm滤膜过滤后,经固定化金属配体亲和柱(IMAC)层析,最终得到的rhTNFβ融合蛋白纯度可达90%左右.融合蛋白经肠激酶酶切后,具有TNFβ的细胞毒活性,比活性为9.76×10<6>u/mg,回收率为25.6%.
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