基于金纳米粒子的含糖免疫佐剂合成及其调控

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未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核糖核苷酸(CpG ODNs)佐剂自带免疫活性,可以仿细菌、病毒的病原体相关分子模式。而且其可以与抗原提呈细胞(APCs),如巨噬细胞、树突细胞(DCs)或B细胞中的Toll-like Receptor9(TLR-9)特异性结合,上调主要组织相容复合体(MHC)和共刺激分子,表达促炎症细胞因子,促进Th1免疫反应,诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)反应。因此,未甲基化CpG佐剂在治疗肿瘤和传染病方面具有巨大的应用价值。但是,由于CpG ODNs易进入体循环系统,难以在淋巴结中积累,易被核酸酶降解,不易被APCs细胞或者B细胞吸收,在临床应用上受到很多限制。本文通过活性可控自由基聚合,将糖和邻苯二酚基团引入到聚合物链中,利用邻苯二酚基团的化学性质,成功制得一种新型的含糖佐剂纳米粒子。随后通过改变聚合物分子量、化学组分以及其与氯金酸的比例等手段调控纳米粒子的尺寸和形貌。本论文研究的具体内容主要分为以下两个部分:(1)结合多巴胺化学和光诱导RAFT聚合制备新型含糖佐剂纳米粒子。我们采用光诱导可逆加成-断裂转移自由基(Photo-induced RAFT)聚合方法,成功得到含有邻苯二酚基团和糖单元的共聚物。然后,利用邻苯二酚基团的化学性质原位还原氯金酸,成功制备糖功能化的金纳米粒子,最后将巯基CpGODNs接到金纳米粒子表面,得到一种新型的含糖免疫佐剂纳米粒子。实验结果表明,光诱导RAFT聚合得到的聚合物中含有邻苯二酚基团和糖单元,而且该聚合物的分子量可控,分布较窄:合成的含糖佐剂纳米粒子呈微球型,粒径在30纳米左右;体外实验表明,该免疫佐剂对细胞的毒性低,可以增强CpG的免疫活性。(2)含糖金纳米粒子尺寸和形貌调控研究。通过改变聚合物的分子量和其与氯金酸的比例等手段调控其尺寸。发现分子量小的聚合物还原氯金酸的速度快,而且金纳米粒子尺寸随着聚合物中邻苯二酚基团与氯金酸的比例的增大而减小,当到达一定比例后,基本保持不变。而当聚合物链中引入N-异丙基丙烯酰胺(NiPAAm)后,可以得到三角形和六边形等不规则形貌的含糖金纳米粒子。
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