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类似FMRF酰胺多肽(FMRFamide-like peptide, FLP)在线虫中广泛存在,对调节线虫运动、取食、感知环境、建立寄生行为具有重要作用,深入研究植物寄生线虫FLP的功能对线虫防治具有重要意义。本研究以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)2龄幼虫为研究材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)的方法,克隆了南方根结线虫(Meloidogyne incognita )FLP基因Mi-flp-16,Mi-flp-27和Mi-flp-31,并利用原位杂交技术进行基因定位,为探讨flp基因的功能及其应用奠定了基础。主要研究结果如下:1.克隆目的基因:利用生物信息学筛选靶标基因的EST序列,以南方根结线虫2龄幼虫为研究对象,利用RACE法克隆了目的基因cDNA全长序列,并进行分析。3个基因全长分别为690 bp、429 bp、358 bp,开放阅读框分别为522 bp、279 bp、267 bp。Mi-flp-16编码174个氨基酸的蛋白,预测蛋白分子量大约是20.7 KDa,等电点9.45,GenBank登录号为EU549831;Mi-flp-27编码93个氨基酸的蛋白,预测蛋白分子量大约是10.5 KDa,等电点9.80,GenBank登录号为AW871675; Mi-flp-31编码89个氨基酸的蛋白,预测蛋白分子量大约是10.3 KDa,等电点9.51,GenBank登录号为BM882182。3个flp基因编码了5个FLPs,分别为Mi-FLP-16(×2 AQTFVRF, GQTFVRF),Mi-FLP-27(AKGSRMRF),Mi-FLP-31(LYRPRGPPRF)。这三个基因都是在植物寄生线虫中第一报道全长序列,并且基因Mi-flp-31,是在整个线虫门中第一次报道的全长序列。2.原位杂交确定基因表达位置:根据目的基因设计特异探针,利用原位杂交确定基因表达位置。结果显示3个基因表达位点均在线虫的围喉神经环处。围喉神经环是线虫的神经中枢,基因表达在此处,说明这3个基因与线虫的神经系统有着密切的关系。确定基因表达位置对进一步研究基因功能有着重要的作用。