【摘 要】
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软骨藻酸（Domoic acid DA）是一种强烈的神经毒素,可影响人和动物的消化道、心血管系统、中枢神经系统。研究发现,人类通过进食可耐受的最大限量为20mg/kg。因此,快速准确监控DA污染,对预防DA中毒是十分有必要的。目前,测定DA的方法中液相色谱方法需要配备专业大型仪器设备和专业技术人员,不适合现场快速检测,而免疫检测方法抗体获得周期长且不可控因素太多。分子模拟技术和荧光检测方法优化筛选
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软骨藻酸（Domoic acid DA）是一种强烈的神经毒素,可影响人和动物的消化道、心血管系统、中枢神经系统。研究发现,人类通过进食可耐受的最大限量为20mg/kg。因此,快速准确监控DA污染,对预防DA中毒是十分有必要的。目前,测定DA的方法中液相色谱方法需要配备专业大型仪器设备和专业技术人员,不适合现场快速检测,而免疫检测方法抗体获得周期长且不可控因素太多。分子模拟技术和荧光检测方法优化筛选特异性识别DA的多肽链:首先通过分析1YAE蛋白复合物晶体结构,以及与DA的对接结果,确定最终的亲本多肽片段GLU 738-LYS 762并截取含有该肽段的多肽集合;其次是虚拟氨基酸突变自建多肽库,选择上述对接结果较好的多肽链进行基于亲和力和稳定性的虚拟氨基酸突变,得到新的结果序列。再次是将所有多肽链整合自建多肽库并且依据分子动力学模拟结果筛选出与DA对接结果最优的三条多肽链（P54、P92、P93）;最后是应用荧光方法进一步筛选多肽链:应用荧光素（量子点和异硫氰酸荧光素）分别修饰相同浓度的三条多肽合成荧光探针,应用荧光分光光度计比较三条肽链与荧光素的结合能力以及特异性识别目标物的能力,根据荧光检测结果确定P92作为识别元件进行荧光检测方法的建立。量子点（quantum dots QDs）-特异性多肽链荧光检测方法的建立:制备QDs-P92荧光探针,并对探针偶联比例,氧化石墨烯（Graphene oxide GO）的浓度和孵育时间,DA的孵育时间等会影响DA识别的重要实验条件进行优化,建立基于FRET的荧光检测方法,DA在9-100μg/L的浓度范围内具有良好的线性关系（R~2=0.9993）,方法的检出限（S/N=3）为8.59×10-1μg/L。该方法特异性、准确性和稳定性均良好,加标回收率在88.10%-113.02%范围内。异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate FITC）-特异性多肽链荧光检测方法的建立:制备FITC-P92荧光探针,并对探针偶联比例,GO的浓度和孵育时间,DA的孵育时间等会影响DA识别的重要实验条件进行优化,建立基于FRET的荧光检测方法,DA在10-100μg/L的浓度范围内具有良好的线性关系（R~2=0.9945）,方法的检出限（S/N=3）为6.52×10-1μg/L。该方法特异性,准确性和稳定性均良好,加标回收率在85.45%-107.84%范围内。
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