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目的意义 空间免疫抑制一直是困扰航天医学的主要问题。中医药以其独具特色的优势在载人航天中广受关注。本项目拟以我国航天员必备药太空养心方君药人参和黄芪作为研究对象,结合多学科交叉手段,对其免疫活化作用及其配伍增效机制进行研究。以期初步阐明太空养心方君药配伍的科学内涵,为我国“航天中药”的研究提供参考。方法 分别以太空养心方中君药人参、黄芪及人参黄芪配伍水提液为研究对象,设置高中低(500μg/ml,250μg/ml,125μg/ml)三个剂量梯度,以小鼠脾淋巴细胞为研究载体,采用CCK-8法测定细胞增殖率。同时,通过微量量热法仪获取生物热动力学P-t曲线,细胞最大产热量(Pmax),细胞产热达峰时间(T),细胞总产热量(Q)。统计学分析人参和黄芪的协同效应参数(CI),并以给药浓度为自变量,不同热力学参数为因变量进行线性回归分析。采用LC-Q-TOF-MS对受试药物成分进行定性检测,并结合网络药理学技术及分子对接技术,按照相关度参数对系统网络拓扑参数进行排序和节点蛋白的筛选,对入围节点蛋白进行KEGG及Go通路富集分析。结果 1.微量量热法法及CCK-8法研究人参与黄芪对脾淋巴细胞活化作用通过绘制脾淋巴细胞P-t曲线,及分析Pmax,Q和tmax三个参数,我们发现与对照组相比,人参组、黄芪组和参芪配伍组各剂量均显著促进小鼠脾淋巴细胞产热活化(P<0.05)。回归分析显示,黄芪组及参芪配伍组呈现出较好的量效关系。同时,各给药组相比于对照组,均显著提高脾淋巴细胞增殖率(P<0.05),具有较好的促进细胞增殖作用。协同效应分析发现,中低剂量组参芪配伍即可引起脾淋巴细胞产热活化并优于人参或黄芪单用(CI=0.780;CI=0.811)。2.系统药理学及分子对接技术探究人参与黄芪活化脾淋巴细胞机制经筛选,本研究纳入人参活性成分23个,黄芪活性成分15个进行生物机制网络构建。计算人参拓扑参数中位数,点度中心性(Dgree)为1,中介中心性(Betweenness centrality)为0,接近中心性(Closeness centrality)为0.23752495;黄芪拓扑参数中位数,点度中心性(Dgree)为1,中介中心性(Betweenness centrality)为0.000001645,接近中心性(Closeness centrality)为0.24401164。最终我们筛选出满足以上条件的27个靶点(人参)和29靶点(黄芪)为主要的活化脾淋巴细胞的药效靶点。人参黄芪主要活性成分与主要药效蛋白结合的吉布斯自由能较低(FE<0),显示出较好的结合力。3.通路富集分析探究人参黄芪活化脾淋巴细胞的协同增效机制通过KEGG通路富集分析发现,人参共通过21条通路参与淋巴细胞活化,黄芪共通过24条通路参与淋巴细胞活化。以P-value<0.01为筛选条件,对人参黄芪进行通路相关度排序,并分别筛选出与两药相关度最高的前十个通路,我们发现人参与黄芪通过作用靶点的互补,对6条通路发挥共同调控作用,可能是人参黄芪配伍增效的内在生物基础。结论 本研究初步证实太空养心方君药人参黄芪对小鼠脾淋巴细胞的活化作用,同时从多种角度初步揭示其作用机制及配伍增效的科学内涵,为我国“航天中药”的研究提供参考。