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背景苯(benzene)是一种广泛使用的化学原料和有机溶剂,长期低浓度苯暴露可能损害造血系统甚至导致白血病。利用生物监测可以全面反应机体的实际接触情况,为了有效识别、评价苯的职业暴露水平,美国、德国、新加坡等发达国家根据本国苯的环境限值标准,已经先后研制了苯的生物限值标准。苯的生物代谢产物包括酚类、反-反式粘糠酸(t,t-MA)和苯巯基尿酸(S-phenylmercapturic acid ,S-PMA)等,S-PMA是苯的特异性代谢产物之一,其作为苯的生物标志物受到普遍认可。为保护职业接苯人群的身体健康,我国目前修订的苯的时间加权平均容许浓度(PC-TWA)为6mg/m3,根据环境暴露限值探讨研制符合我国实际情况的生物接触指标的检测方法及生物接触限值标准已经提到议事日程。目的根据高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)的基本分析原理和S-PMA理化性质,探讨运用HPLC法检测尿中S-PMA的尿样预处理方法及色谱柱类型、柱温、流动相、检测波长等色谱条件的具体选择,为开展苯的职业暴露生物监测提供方法学依据;在HPLC法测定尿中S-PMA的方法学研制基础上,通过对苯的环境监测数据与尿中S-PMA的测定浓度进行相关分析,结合我国目前苯的环境暴露限值(PC-TWA=6mg/m3),提出我国职业苯暴露生物监测的S-PMA生物接触限值和应用条件。方法选择非职业接触苯及非吸烟的学生作为本次研究所用尿样基质,根据测定分析目的在尿样基质中加入相应浓度的S-PMA储备液,运用合适的预处理方法,采用Shim-pack VP-ODS色谱柱、35℃柱温、205nm紫外检测波长和混合流动相等色谱条件对样品中的S-PMA进行定性定量分析。配制不同浓度S-PMA标准系列,通过制作标准曲线,求证测定方法测定S-PMA的浓度线性范围;配制三种浓度的S-PMA尿样,通过加标回收检测,计算本方法的回收率;通过不同时间测定平行样品的S-PMA浓度,计算本方法的精密度。将尿样放置于不同温度环境中,于放置前、放置后3天、7天和14天对尿样中的S-PMA进行测定,计算其稳定性。选择32名职业接触苯的工人作为研究对象,对研究对象的环境暴露水平进行个体采样,收集研究对象班末尿样,通过HPLC法测定尿样中S-PMA浓度,通过环境苯浓度与尿液S-PMA浓度相关回归分析,结合我国目前苯的环境暴露限值(6mg/m3)计算符合我国情况的S-PMA生物接触限值。结果S-PMA的保留时间在30.5min左右,所建立的标准曲线在S-PMA的质量浓度为40～2000μg/L时线性关系良好(r=0.9997),检测限40μg/L,加标回收率为92.64%～103.66%,日内与日间精密度的相对标准偏差分别为2.4%～14.5%和3.8%～9.2%。将尿样放入冰箱前当天、放入后第3天、第7天及第14天,计算4℃及-20℃条件下保存的尿样S-PMA的相对标准偏差分别为6.60%和2.40%。32名职业接苯工人空气样品个体采样检测数据显示,空气苯的平均浓度为(41.16.±34.74)mg/m3。32名工人尿中的S-PMA浓度为(464.04.±400.79)μg/g Cr;将班末尿S-PMA与个体接苯水平建立直线回归方程为:Y(μg/g Cr)=10.134 X(mg/m3)+47.104,(n=32,r=0.7712,P<0.01)。结合我国目前苯的环境暴露限值为6mg/m3,计算的S-PMA生物接触限值为107.89μg/g Cr。结论1. HPLC法测定尿中S-PMA的色谱条件为:采用C18柱进行分离,以乙腈作为流动相A,乙腈-甲醇-三乙胺为流动相B进行梯度洗脱,流速2ml/min,柱温35℃,紫外检测波长205nm;2. HPLC法测定尿中S-PMA的色谱行为、最低检测限、检测线性范围、测定的准确度、精密度等能满足职业苯暴露生物限值测定基本要求;3. HPLC法测定尿中的S-PMA,其尿样保存在4℃及-20℃条件下的时间建议在14天左右;4. HPLC法测定职业接苯人群尿液S-PMA的浓度与其空气环境暴露浓度具有良好的相关性,尿液中S-PMA水平可以作为评价职业苯暴露的生物标志物;5.根据我国目前苯的环境暴露限值为6mg/m3,建议S-PMA生物限值标准为100μg/g Cr;