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MBL系C型凝集素超家族中胶凝素家族的重要成员，是机体天然免疫系统中的关键分子。它可识别多种病原体的糖结构，并通过调理吞噬和激活补体凝集素途径来清除病原微生物和受感染细胞。MBL功能的发挥有赖于其寡聚体结构和一定的血清浓度，血清中MBL缺乏或浓度过低是引起调理吞噬缺损的根本原因，使机体对各种病原微生物的易感性增高，可导致机体反复感染，并与自身免疫病如SLE、RA等的发生、发展有关。 MBL由肝细胞合成并分泌入血，其结构基因点突变和启动子区SNP共同决定MBL的血清水平。结构基因的每种变异体均由单碱基突变引起，致使MBL分子的胶原样区发生改变，导致突变个体血清MBL水平低下，有可能突变MBL分子的功能也受损。MBL启动了区极其复杂，含外显子0和多个调控序列，已发现启动子区7个单碱基变异和1个六碱基缺失，其中对血清MBL水平影响较大的是H/L、X/Y和P/Q等3个多态性位点，分别位于-550、-221和+4。不同的启动子基因型调控MBL基因转录水平，结合结构基因的突变体，使得不同种族人群间，甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大。 我国是一个多民族人口大国，有必要对各民族人群MBL基因的多态性情况进行调查，以便为我国MBL缺损的防治研究提供决策依据。鉴于此，我们对汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群MBL基因启动子区主要SNP位点进行了等位基因及其单倍型与基因型的研究。 目的： 1．建立特异性强、敏感性高、简单快捷的检测MBL基因启动子区SNP的技术，并适于分析其单倍型与基因型。 2．利用该技术对汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群MBL基因启动子区主要SNP位点进行研究，明确其等位基因、单倍型及其基因型的分布情况。 材料与方法： 1．收集汉族、佤族、白族、拉祜族及蒙古族普通人群血标本，提取白细胞基因组DNA，并建立扩增包含X/Y等位基因的目的基因片段的SSP-PCR反应体系，检测MBL基因启动子区H/L和P/Q等位基因。 2.建立PCR一MB可视荧光检测技术。 3.建立PCR一MB实时(real time)荧光检测技术，分析分析汉族、低族、白族、拉枯族及蒙古族人群MBL基因启动子区刀Y等位基因。 4.结合SSP一PCR和PCR一MB的检测结果，确定MBL基因启动子区SNP的单倍型、基因型及其频率，分析各民族间分布的差异。结果: 1.用红细胞裂解液和PCR缓冲液/非离子去污剂/蛋白酶K两种自配试剂成功地提取了人白细胞基因组DNA，并以此为模板成功扩增出预期目的基因片段。 2.所建立SSP一PCR反应体系实现了对等位基因曰L和P/Q的检测，为单倍型及基因型分析奠定了基础。 3.建立了PCR一MB可视检测技术，简便快捷、条件要求较低，达到了分辨单碱基差异的特异性。 4.建立了PCR一MB实时检测技术，并分析了汉族、低族、白族、拉枯族及蒙古族普通人群MBL基因启动子区习Y等位基因。 5.确定了各民族MBL基因启动子区主要SNP位点等位基因及其单倍型与基因型的分布情况: (l)等位基因L用在5个民族间的分布差异具有统计学意义(p<0.01)，L等位基因在5个民族的总体分布均高于H等位基因;低族和白族L等位基因频率低于汉族、拉枯族和蒙古族。 (2)刃Y、P/Q等位基因在5个民族间的分布无统计学意义差异(p>0.05)，刀Y等位基因在5个民族均以Y等位基因为主，总体达89%;P/Q等位基因在5个民族间的分布频率较接近。 (3)各单倍型在5个民族间的分布具有统计学意义差异(p<0.01):汉族、拉枯族以单倍型LYP、LYQ为主，低族以HYP、LYQ的频率较高，而白族、蒙古族以HYP、LYP、LYQ的频率较高。 (4)各基因型在5个民族间分布的差异具有统计学意义(p<0.01):汉族以基因型LYP/LYQ、LxP几YQ为主，侃族以LYP/LYQ、LYQ/LYQ、LXP/LYQ、HYr/贾Q及HYP/H Yp的频率较高，白族以LYp几，YQ、LYQ/比Q、Lxp/LYQ和HYP肛YP的频率较高，拉枯族以LYP/LYQ、Lxp几YQ及HYP/LYQ的频率较高，蒙古族以LYP/LYQ、LYQ/LYQ、LXPILYQ和HYP肚YP的频率较高。总体上，基因型LYP/LYQ和Lxp几YQ在5个民族均具较高频率，其总体分布频率分别达44.1%和16.6%。结论: 1 .PCR一MB技术特异性强，简单快捷，能进行可视检测，也能进行高通量、自动化的实时分析，完全适用于点突变和SNP的研究，技术特点明显优于PCR-SSCP、PCR一RFLP、PCR一550等传统的点突变或SNP检测方法。 2.联用SSP一PCR和PCR一MB技术，有利于对功能基因的单倍型及基因型的研究。 3.汉族、低族、白族、拉枯族及蒙古族普通人群之间，MBL基因启动子区等位基因UH的分布存在差异，刀Y和P/Q无统计学意义的差异;各单倍型和各基因型的分布存在差异;基因型LYP/LYQ和LXP/LYQ在5个民族均有较高的分布，其总体频率分别达44.1%及16.6%。