离子交换色谱复性蛋白质

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该文以离子交换色谱作为复性手段,对变性的鸡卵白溶菌酶、重组超氧化物歧化酶以及重组人溶菌酶的折叠复性进行了研究,并对复性后的蛋白质混合物进行了分离,用色谱方法和光谱学方法进行了性质检测.对于三种不同的蛋白质,首先使用稀释复性方法考察了各种影响因素对蛋白质折叠复性效率的影响,获得不同蛋白质在稀释复性时的优化条件.在此基础上,研究了蛋白质的离子交换色谱复性方法.采用三种缓冲液体系:(1)变性缓冲液溶解蛋白质并向色谱柱进液,使伸展的变性蛋白质吸附到离子交换色谱介质表面;(2)用复性缓冲液向色谱柱梯度进液以取代柱中的变性缓冲液,使蛋白质在色谱柱上自发地折叠;(3)用高浓度盐离子的洗脱缓冲液把折叠后的蛋白质洗脱出来.在对鸡卵白溶菌酶的色谱复性时发现,在复性缓冲液和洗脱缓冲液中加入低浓度的变性剂,可以提高蛋白质的复性效率,蛋白质的复性收率从文献报道的不到10﹪提高到40﹪.添加的变性剂可以使折叠的蛋白质分子结构比较稳定,并能提高蛋白质的比活性.
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