【摘 要】
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背景肾癌是泌尿系统常见肿瘤之一,有许多患者初诊即为晚期肾癌,失去了手术治疗的机会。免疫治疗在晚期肾癌中发挥着重要作用,然而,仍然只有较少部分患者对免疫治疗有阳性反应,且其中还有相当比例的患者后续会出现免疫治疗耐药的情况。多项高质量临床研究均发现免疫治疗耐药的癌症患者会出现包括B2M基因在内的MHC-I类分子表达突变缺失的情况,且不发生突变的患者人群免疫治疗效果明显更好。然而,B2M在肾癌中的表达与
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背景肾癌是泌尿系统常见肿瘤之一,有许多患者初诊即为晚期肾癌,失去了手术治疗的机会。免疫治疗在晚期肾癌中发挥着重要作用,然而,仍然只有较少部分患者对免疫治疗有阳性反应,且其中还有相当比例的患者后续会出现免疫治疗耐药的情况。多项高质量临床研究均发现免疫治疗耐药的癌症患者会出现包括B2M基因在内的MHC-I类分子表达突变缺失的情况,且不发生突变的患者人群免疫治疗效果明显更好。然而,B2M在肾癌中的表达与患者预后的相关性以及B2M是否可以直接调节CD8+T细胞对肾细胞癌的杀伤作用还不得而知。目的探究B2M基因在肾癌预后中所扮演的角色及其在肾癌抗肿瘤免疫中的作用,揭示影响调控B2M基因表达进而调控肾癌免疫的背后机制。方法本研究首先借助公共数据库使用生物信息学研究方法,评估了B2M基因表达水平与肾癌预后的相关性,并结合体外实验得到了B2M基因在人和balb/c小鼠肾癌和癌旁组织中的表达差异。接下来,我们在Renca细胞中过表达了B2M基因并使用体外共孵育模型,在24小时后利用流式细胞仪、实时荧光定量PCR、Elisa等技术多维度地分析了肾癌抗肿瘤免疫的变化。此后,我们分别外源性添加了α-酮戊二酸处理Renca细胞并构建了KDM5B-Sh RNA和KDM5C-Sh RNA质粒转染进Renca细胞,利用Western、实时荧光定量PCR等技术来探究调控B2M基因表达背后的机制。结果生信分析发现B2M基因肾癌患者中高表达与较好预后相关,且与PD-1治疗肾癌疗效及肾癌CD8+T细胞浸润正相关,生信结果和体外实验均发现B2M基因在肾癌中表达较正常组织更高,体内实验发现在对小鼠用肾癌细胞皮下荷瘤后使用PD-1抗体治疗,治疗后B2M的表达上升。在balb/c小鼠肾癌Renca细胞中过表达及敲低B2M基因对细胞增殖和凋亡无明显影响;将过表达B2M基因的Renca细胞与CD8+T共孵育后发现,CD8+T细胞对Renca细胞的杀伤作用明显增强,细胞因子IL-17、TNF-α、IFN-γ的分泌明显增加,CD8+T细胞表面共刺激受体Tim3的mRNA水平表达上升,但对总淋巴细胞的增殖分化无影响。体外加入α-酮戊二酸后,Renca细胞B2M表达及H3K4me1蛋白水平增加;敲低KDM5B基因后,Renca细胞B2M表达及H3K4me1蛋白水平降低。将敲低了KDM5B基因后的Renca细胞与CD8+T细胞共孵育后发现,CD8+T细胞对Renca细胞的杀伤作用有所降低,细胞因子TNF-α、IFN-γ的分泌有所下降,但是IL-17的分泌及CD8+T细胞表面共刺激/共抑制分子mRNA水平无变化。结论B2M基因在肾癌患者中高表达与较好预后相关,B2M高表达可增强CD8+T细胞对Renca细胞的杀伤作用,KDM5B可以通过调节B2M基因组蛋白的甲基化进而调节CD8+T细胞对Renca细胞的杀伤。
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