RNA干扰沉默HIF-1α对人乳腺癌细胞功能的影响

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研究背景 缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下产生的一种重要的转录因子,其诱导表达的基因与能量代谢、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长,转移以及肿瘤多药耐药等相关。多数肿瘤具有缺氧的微环境,在肿瘤形成过程中一个关键的步骤是对缺氧的适应,HIF-1就在这个过程中发挥了重要的作用。HIF-1广泛存在于动物及人体的多种肿瘤细胞中,其活性对维持肿瘤细胞的能量代谢,血管新生,促进肿瘤增殖和转移起到重要作用,因此成为肿瘤治疗的重要靶点。新近发展起来的RNA干扰技术能够高效特异地沉默靶基因的表达,成为基因治疗的重要工具。目的 研究靶向针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞功能的影响。方法 通过在细胞培养中加入150μmol/L氯化钴(CoCl2)模拟低氧环境。采用RNA干扰技术,构建靶向针对HIF-1α的shRNA真核表达载体,利用脂质体lipofactamine 2000将shRNA真核表达载体转染入MCF-7细胞中,经G418(400μg/ml)筛选得到抗性克隆。MCF-7细胞经150μmol/L的CoCl2处理24小时后,通过Real-time PCR和Western blot分别检测HIF-1α的mRNA和蛋白水平的变化。Annexin V/PI荧光标记检测细胞经150μmol/L的CoCl2处理24小时后MCF-7细胞凋亡的
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