大肠杆菌是一种重要的条件致病菌，能引起腹泻甚至导致死亡。大肠杆菌的毒性往往和其O抗原悉悉相关。O抗原位于革兰氏阴性细菌脂多糖分子的最外层，一般由多个寡糖重复单位组成。O抗原具有高度多样性，并对细菌细胞膜功能的完整性非常重要。对O抗原合成途径的研究有利于揭示细菌的致病机理，也可为抗生素和疫苗等的研究和生产提供依据，从而使大肠杆菌引起的传染病得到更好的治愈。　　 在大肠杆菌O抗原中已鉴定了十几种单糖的合成基因，本研究将对大肠杆菌中罕见单糖L-RhaNAc3NFo的合成途径以及糖基转移酶的功能进行鉴定。这不仅有助于加深我们对O抗原基因簇功能及其合成途径的理解，也可为实现糖的体外合成奠定基础。　　 本研究根据已获得的O抗原结构以及O抗原基因簇序列，利用生物信息学的手段，在实验室前期工作基础上完成了进一步的预测。预测发现大肠杆菌G1059中的罕见单糖L-RhaNAc3NFo共由4个基因编码的蛋白合成，分别为orf4、orf5、orf6和orf7，并对蛋白的功能进行了初步的预测。另外本研究还预测了大肠杆菌G3198和G2805中负责半乳糖转移的糖基转移酶orf11和wbwC基因的功能。　　 本研究利用T7原核表达系统构建了相关基因的重组质粒，并在E.coli BL21(DE3)中对目的蛋白进行了表达，确立了目的蛋白的最适表达条件，同时对Orf4、Orf5、Orf6和Orf7蛋白进行了纯化。随后建立了体外的酶促反应，并采用毛细管电泳和质谱的方法对酶促反应的产物进行了鉴定。