在HIV-1侵入细胞的过程中,包膜蛋白(Env)发挥了关键作用,介导了病毒与宿主细胞受体、共受体的结合以及病毒包膜与宿主细胞细胞膜的融合。在膜融合过程中,6-HB结构的形成是必需的步骤,因此其成为膜融合抑制药物作用的关键靶点。SC29EK与SFT同属于通过抑制病毒6-HB形成来阻断病毒与细胞膜融合过程的第三代HIV-1膜融合抑制剂,都具有螺旋内盐桥的设计,相比前代抑制剂其拥有更好的结构稳定性和抗病毒效果。我们前期利用SC29EK筛选出了耐药株gp41蛋白保守序列上发生的氨基酸突变位点(Gln39、Asn43、Glu49),分别简称Q39R、N43K、E49A,利用SFT筛选出了耐药株gp41蛋白保守序列上发生的氨基酸突变位点(Val38、Ala47、Gln52),分别简称V38A、A47I、Q52R。本课题以能够表达HIV-1病毒Env包膜蛋白的质粒作为模板进行定点突变,获得了 15份突变质粒,分别对应筛选出来的点突变及点突变组合。利用capture ELISA技术检测证实了这些点突变或者点突变组合不会影响Env蛋白的表达。利用转染表达的包含点突变或者点突变组合的假病毒,我们分析了突变对病毒入侵能力、膜融合能力以及对膜融合抑制剂SC29EK与SFT耐药性的影响。利用以病毒NHR多肽N36为模板合成的包含有待研究点突变以及点突变组合的12种多肽,我们分析了突变对6-HB结构稳定性的影响,对N36与膜融合抑制剂之间结合力的影响。利用ELISA技术和6-HB构象特异性抗体,我们还探索了突变对6-HB构象的影响。综合来说,本课题主要从发现的点突变以及点突变组合对病毒耐药性、病毒Env功能、病毒6-HB结构稳定性、病毒N肽与膜融合抑制剂结合能力的影响这几个方面,来探讨SC29EK、SFT耐药株的耐药机制。通过对实验结果的分析,本课题研究得出以下结论:(1)N43K使得突变毒株对SC29EK高度耐药,当N43K与Q39R或者E49A组合,其对SC29EK耐药性会进一步提升,Q52R使得突变毒株对SFT高度耐药,Q52R与V38A、A47I结合会使其对SFT耐药性大幅提升;(2)这些突变同时使得毒株获得对T20、C34、2P23等不同膜融合抑制剂的交叉耐药能力;(3)部分突变能降低N肽与抑制剂的结合能力,部分突变能增强N肽与内源性C肽的结合能力,点突的组合还能发挥协同作用,从而产生更强的耐药性;(4)突变使病毒获得耐药性的同时,会使病毒Env蛋白的功能部分丧失;(5)点突变会改变病毒6-HB的构象。本课题研究为理解HIV-1耐药株的耐药机制提供了新的视角,加深了对gp41蛋白结构与功能关系的理解。