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糖结合蛋白(glycan-binding proteins, GBPs)是一类能与生物体内糖类物质特异性结合的蛋白质,参与细胞识别、信号传递、以及细胞的生长、分化、迁移和凋亡等多种重要生物学过程,已被证实与多种癌症的发生、发展过程密切相关。目前研究表明:在乙型肝炎-肝硬化-肝癌发生过程中,患者血清和组织中均伴有糖结合蛋白的改变,而患者的唾液中是否存在类似的糖结合蛋白的变化尚不清楚。本课题利用糖芯片技术研究乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者相较于健康志愿者唾液中糖结合蛋白的表达变化,筛选识别乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中共有的和特有糖结合蛋白的糖探针,为肝癌的早期诊断提供实验依据,同时研究唾液中糖结合蛋白变化与肝癌发生发展的关联性。本研究主要内容:(1)利用本实验室制备的含41种糖探针的糖芯片,对乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中糖结合蛋白进行初步筛选,发现:在乙肝患者唾液中,有19种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中11种糖探针(6a-Mannobiose、3’-Sialyl-Lewis-a-tetrasaccharide. NA2F. LNDF Ⅰ、Lewis-Y tetrasacchande、LNDF II. Gal.4β-Gal. GalNAc和GlcNAc)识别的GBPs表达上调,8种糖探针(Man-3Glycan、6’-SL、iso-A-Pentasaccharide. LNT、3a,4p、3a-Galactotetraose、GlcNAc-O-Ser. Glu和NGA2Glycan)识别的GBPs表达下调;在肝硬化患者唾液中,有18种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中8种糖探针(Man、NeuAc. Fuc.3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine. Gal. Lac、GlcNAc和Xyl)识别的GBPs表达上调,10种糖探针(3’-SLN、NA2F、LNDF Ⅰ、LNF-Ⅰ、 Lewis-Y tetrasaccharide. LNDF Ⅱ、 iso-B-Pentasaccharide.4β-Gal、GLNBP和Hyaluronic acid)识别的GBPs表达下调;在肝癌患者唾液中,有20种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中13种糖探针(6a-Mannobiose、3’-Sialyl-Lewis-a tetrasaccharide、NA2F、Fuc、LNDF I. Lewis-Y tetrasaccharide、LNDF Ⅱ Gal4β-Gal. GalNAc、Cellobiose. Hyaluronic acid和3a,4p,3a-Calactotetraose)识别的GBPs表达上调,7种糖探针(Man-3Glycan、NeuAc.3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine. iso-A-Pentasaccharide. Glu、 NGA2Glycan和Xyl)识别的GBPs表达下调。综合比较分析三组糖芯片筛选差异表达的GBPs结果,发现:NA2F、LNDFⅠ、Lewis-Y tetrasaccharide等6种糖探针识别的GBPs在乙肝、肝硬化和肝癌发展过程中均发生差异性表达;Man、Man-9Glycan和N-NeuAc等8种糖探针识别的GBPs在肝癌患者唾液中出现了与乙肝、肝硬化患者不同的表达;6a-Mannobiose、3’-Sialyl-Lewis-a tetrasaccharide、NA2F等9种糖探针识别的GBPs在乙肝患者唾液中高表达,而在肝硬化患者低表达或无差异性变化;3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine、Xyl、Lac等6种探针识别的GBPs在肝硬化患者唾液中高表达,而在乙肝患者低表达或无差异性变化。(2)制备了一款唾液芯片用于验证乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中差异表达的GBPs根据糖芯片结果,选择了2种与乙肝、肝硬化和肝癌都相关的单糖Gal和Man用于唾液芯片的验证。验证结果显示Gal识别的GBPs在乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液中均高于健康志愿者唾液,Man识别的GBPs在肝硬化唾液中高表达,而在乙肝、肝癌患者唾液中低表达或无差异性变化,与糖芯片结果一致。