为了更好的调控硝酸根同化过程和硝酸信号的响应,筛选鉴定烟草中硝酸还原酶基因NIA1启动子、NIA2启动子的互作蛋白以及假定顺式元件NRE2的结合蛋白,本实验以烟草基因组为模板,选取NIA基因上游1 kb左右片段,设计引物,克隆烟草NIA基因启动子片段,构建瞬时表达载体用于鉴定。以普通烟草品种K326为材料,依照Clontech公司的酵母单杂交系统筛选方法完成了 K326酵母单杂交cDNA文库的构建及NIAl基因启动子、NIA2基因启动子和4×NRE2顺式元件的转录因子筛选。结果表明,经过生物信息学分析及瞬时转染GUS基因鉴定,所克隆NIA上游片段具有启动子功能。酵母单杂交文库构建成功。经测序比对,NIA1启动子、NIA2启动子、4×NRE2片段分别筛选出8、3、3个cDNA序列,分别对其进行生物信息学分析,结果显示14个蛋白基因序列中有12个为烟草同源基因,利用PredictProtein在线工具对比对到的阳性克隆氨基酸序列进行分析预测。结合位点预测结果表明,NIA1启动子诱饵片段筛选到的5个阳性克隆蛋白序列和NIA2启动子诱饵片段筛选到的2个以及4×NRE2诱饵片段筛选到的2个共9个阳性克隆蛋白序列同时含有DNA/RNA结合区以及蛋白质结合区,具有与核酸序列和蛋白质结合的功能,可满足转录因子结构中的DNA结合域要求。其余阳性克隆蛋白序列中都存在多个蛋白结合位点,可能与其他蛋白形成配体后共同参与调控某些生命过程,但其具体功能尚需进一步验证。