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本研究根据杂合抗菌肽分子设计原理,应用生物信息学和分子生物学的实验技术与方法,以家蝇抗菌肽Cec Md和中国林蛙抗菌肽Chensirin为母体肽,设计出两条具有抗菌潜力的杂合肽,命名为杂合抗菌肽CC31和CC34。采用重叠延伸PCR方法合成杂合抗菌肽CC31和CC34的基因并构建其克隆载体。利用表达载体pET32a和pGEX-6p-1构建重组表达载体后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中构建杂合抗菌肽CC31和CC34的基因工程菌。优化基因工程菌pGEX-6P-1/CC31/BL21(DE3)和pGEX-6P-1/CC34/BL21(DE3)的发酵培养条件,对它们的表达产物CC31-GST和CC34-GST进行亲和层析与甲酸切割之后,对杂合抗菌肽CC31和CC34的抑菌活性、溶血活性、稳定性和免疫活性进行初步研究。结果表明:(1)设计出了两条具有形成抗菌肽潜力的杂合肽,命名为杂合抗菌肽CC31和CC34。(2)合成了杂合抗菌肽CC31和CC34的基因,并构建了它们的克隆载体pMD 18-T/CC31和pMD 18-T /CC34。(3)构建的杂合抗菌肽基因工程菌pET32a/CC31/BL21(DE3)、pET32a/CC34/BL21(DE3)、pGEX-6p-1/CC31/BL21(DE3)和pGEX-6p-1/CC34/BL21(DE3)经IPTG诱导后均表达出了融合蛋白。对pGEX-6p-1/CC31/BL21(DE3)和pGEX-6p-1/CC34BL21(DE3)表达出的蛋白进行亲和层析后得到了分子量大小分别为29.6和29.7 kDa的融合蛋白,表达量分别为76和37mg/L菌液。甲酸裂解后得到了分子量大小分别为3.6和3.7 kDa的杂合抗菌肽CC31与CC34。(4)杂合抗菌肽基因工程菌pGEX-6p-1/CC31/BL21(DE3)和pGEX-6p-1/CC34/BL21(DE3)发酵培养的最佳时间为6 h,IPTG浓度为0.4 mmol/L,温度为37℃,培养基为TB培养基。(5)杂合抗菌肽CC31和CC34对热(p>0.05)和不同的pH值缓冲溶液稳定(p>0.05),与Cec Md相比,具有微弱的溶血活性(p<0.01),对致病菌具有抑菌效应,提高了体外大鼠和绵羊淋巴细胞的转化率(p<0.01)。