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目的: 构建携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的人包皮成纤维细胞系，通过诺考达唑(Nocodazole)干预，探究Nocodazole对HFF细胞周期的影响。研究鱼藤酮(Rotenone)对HFF细胞衰老的影响，探究Rotenone促进衰老的相关分子机制。 方法: 1、构建构建mAG-hGeminin-GFP质粒，慢病毒包装，感染293T细胞，收集293T培养液感染HFF细胞。 2、Thymidine-Nocodazole顺序给药处理mAG-hGeminin-GFP-HFF细胞，流式细胞仪观察细胞周期的动态变化。 3、不同浓度的Rotenone处理过的HFF细胞，显微镜下观察各个时间段细胞的形态变化，并计数。 4、Western blot分析各组HFF细胞内P21、P16蛋白表达变化。 结果: 1、成功构建携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的HFF细胞; 2、随着药物撤离时间的延长，越多的细胞被阻滞在G1-S期，GFP+细胞越来越少，衰老细胞富集在GFP+处; 3、对照组和Rotenone加药组比较，加药组细胞体积增大，核固缩，边界不清晰，细胞大量死亡; 4、与对照组相比，Rotenone10μM给药组细胞数明显减少(P＜0.0001)，Rotenone20μM给药组细胞数量显著递减(P＜0.0001)，给药组间相互比较，也有显著的统计学差异(P＜0.01); 5、与对照组相比，给药组P16、P21蛋白表达升高(P＜0.05)有统计学意义。 结论: 成功建立携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的HFF细胞，将细胞周期的动态变化可视化，便于更加直观地理解和观察。Thymidine-Nocodazole顺序给药会把大部分的HFF细胞阻滞在G1-S期，导致细胞衰老。Rotenone可能通过P21/P16信号通路促进HFF细胞衰老。