论文部分内容阅读
目的：建立幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）SS2000(Sydney strain2000)感染 C57BL/6小鼠动物模型，比较苗药头花蓼各剂量组以及与阿莫西林联用时对Hp慢性胃炎小鼠胃粘膜的Hp清除作用和修复保护作用，通过研究头花蓼对Hp感染小鼠胃粘膜内分泌细胞G、D细胞和GAS mRAN、SS mRNA的影响，探讨头花蓼保护修复Hp所致的胃粘膜损伤的作用机理，为临床治疗Hp慢性胃炎及新药的研发提供实验依据。 方法：(1)琼脂稀释法检测苗药头花蓼对Hp悉尼株SS2000的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration，MIC）。(2)将110只无特定病原体（specific pathogen free SPF）级C57BL/6小鼠随机分为模型组（90只）和空白组（20只），造模组以每只小鼠0.5mL Hp SS2000菌液进行灌胃处理，间隔1d，共5次，空白组小鼠灌胃等量无菌脑心浸液肉汤，末次菌液灌胃8w后处死空白组和造模组各10只小鼠，观察Hp感染小鼠模型是否构建成功。(3)成功建模后将造模组小鼠随机分为8组（10只/组），分别进行高、中、低剂量的头花蓼和高、中、低剂量头花蓼联合阿莫西林（作为中西结合高、中、低剂量组）及三联药物和生理盐水（模型组）灌胃治疗，每天灌胃1次，连续2w，停药4w后处死所有组小鼠，用胃粘膜快速尿素酶试验、细菌微需氧培养和Giemsa染色评定各组药物对 Hp的清除效果；HE染色判断药物对胃粘膜是否有保护修复作用；胃粘膜免疫组织化学染色和图像分析软件（Image-Pro-Plus，IPP）检测治疗前后胃粘膜G细胞、胃泌素（Gastrin，GAS）灰度值和D细胞、生长抑素（Somatostatin，SS）灰度值的变化，提取胃粘膜组织的RNA，采用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction，real-time PCR）分析给药前后GAS、SS mRNA的表达差异。 结果：(1)苗药头花蓼对Hp SS2000的体外抑菌活性MIC=4mg/mL；(2)接种Hp后8w，模型组小鼠胃胃粘膜Hp定植率为100％，HE染色结果显示模型组小鼠胃粘膜均呈现慢性炎症改变，证实Hp感染小鼠慢性胃炎的动物模型构建成功。(3)治疗后小鼠胃粘膜幽门螺杆菌定植密度降低，其中中西结合高、中剂量组对Hp的清除作用明显，与模型组比较有显著意义（P＜0.05），三联组可根除Hp；治疗后胃粘膜的炎症浸润程度减轻，头花蓼高剂量组和三联组胃粘膜炎症改善效果明显，与模型组比较，均具有统计学意义（P＜0.05）。（4）Hp感染后小鼠胃粘膜的G细胞和GAS灰度值明显增多（P＜0.05），GAS mRNA表达显著上调（P＜0.05），D细胞和SS灰度值轻度增加，SS mRNA表达上调明显（P＜0.05）。治疗后，头花蓼高、中剂量组和中西药结合高、中剂量组G细胞和GAS灰度值降低明显，GAS mRNA下调显著，与模型组比较，有统计学意义（P＜0.05）。头花蓼组和中西结合高、中剂量组及三联组治疗后，D细胞与SS灰度值下降不明显，SS mRNA下调显著（P＜0.05）；中西结合低剂量组D细胞及SS灰度值明显降低（P＜0.05）。 结论： 1.头花蓼对Hp SS200具有较好的抑菌活性，MIC为4mg/mL。 2.Hp感染可导致胃粘膜受损，刺激G细胞分泌GAS，上调胃粘膜GAS mRNA的表达；反馈调节D细胞分泌SS轻度增加，SS mRNA表达上调。 3.头花蓼对Hp感染小鼠胃粘膜有较好的保护和修复作用，其作用除了与抑制Hp有关，还通过下调GAS mRNA表达以及降低G细胞分泌GAS的途径实现。 4.中西药结合对体内Hp感染小鼠的体内抑菌能力较好，可抑制Hp所致的慢性胃炎的发展。 5.维持GAS和SS平衡可能是苗药头花蓼对Hp感染小鼠慢性胃炎的治疗机制之一。