【摘 要】
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目的:人腹膜间皮细胞(Human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)是腹膜的重要组成部分,在腹膜透析及其所引起的腹膜硬化中扮演着极其重要的角色。腹透相关性腹膜纤维化显著
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目的:人腹膜间皮细胞(Human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)是腹膜的重要组成部分,在腹膜透析及其所引起的腹膜硬化中扮演着极其重要的角色。腹透相关性腹膜纤维化显著的生理形态学改变是腹膜间皮细胞层的丧失和细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的过度堆积,在这两个过程中HPMCs既是受害者,同时也是积极的参与者。在腹膜透析液的生理不相容性环境里,HPMCs本身受到损伤,增生受抑,同时也分泌ECM和多种可促进ECM堆积的细胞因子,其中最重要的是TGF-β1。研究表明对HPMCs产生上述损害的腹膜透析液的主要生理不相容性因素是高浓度葡萄糖及其代谢产物。高糖可破坏HPMCs间的细胞连接,使其脱落;同时能促进HPMCs的凋亡。高浓度葡萄糖还可使HPMCs过度表达转化生长因子-?1(Transforming growth factor- ?1,TGF-?1),而TGF-?1是机体纤维化发生、发展过程中重要的调节因子,可通过下调基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)和上调金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue inhibior of metalloproteinase,TIMP)的表达,使MMP/TIMP失衡从而促进ECM堆积。纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)是细胞外基质的重要成分,能为其它成分的沉积提供支架,在纤维硬化的发生发展中起到了重要的作用。干扰素具有多种生物学活性,在临床上已被应用于肝硬化、特发性肺间质纤维化等疾病的防治。实验证实其抗纤维化的机制与激活胶原酶(MMP-2)降解ECM、抑制TGF-β1等细胞因子的产生有关。但目前未见干扰素治疗腹膜纤维化的相关研究,本实验通过研究干扰素对高糖环境下腹膜间皮细胞分泌FN、TGF-?1、MMP-2的影响,探讨其对腹透相关性腹膜纤维化的防治意义。方法:本实验收集行不卧床持续腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis ,CAPD)的尿毒症患者腹膜透出液中的腹膜间皮细胞,进行原代培养,用胰酶传代,取<WP=5>二代细胞用于实验。对传代细胞光镜下观察其形态;分别用抗人角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体、抗第Ⅷ因子相关抗原抗体,行细胞免疫组化染色鉴定。设实验组和对照组,实验组加2.5%的葡萄糖及不同剂量的干扰素,培养不同时间分别收集上清液,用ELISA法检测其中的FN、TGF-β1、MMP-2含量,并进行统计学分析。结果:1.腹膜间皮细胞: 光镜下培养瓶内培养的人腹膜间皮细胞初呈梭形,约一周左右细胞可达融合,此时细胞呈多边形,形成铺路石样外观。免疫组化染色分析发现细胞角蛋白、波形蛋白抗原阳性;第Ⅷ因子相关抗原阴性。2.FN含量:各加2.5%葡萄糖的实验组均高于对照组,差异具有显著性;加干扰素的实验组FN含量均低于不加干扰素的实验组,差异具有浓度依赖性,浓度为1000u时达到高峰;2. TGF-?1含量:各加2.5%葡萄糖的实验组均高于对照组差异具有显著性;加干扰素的实验组TGF-?1含量均低于不加干扰素的实验组,差异具有浓度依赖性,浓度为1000u时达到高峰;3.MMP-2含量:对照组与实验组间无显著性差异。结论:高浓度葡萄糖可促进腹膜间皮细胞表达FN、TGF-β1,但对MMP-2含量无显著影响。而干扰素对FN、TGF-β1具有相反的作用,提示其可能减少CAPD时细胞外基质的堆积,对预防、延缓腹膜纤维化有一定意义。
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