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瘢痕疙瘩(keloid)是创伤修复的病态产物,中药单体虎杖白藜芦醇(Res)能够诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,且能抑制其增殖,对本病有一定疗效,但其作用的具体机制尚不清楚。瘢痕疙瘩的形成受多种基因、多条信号通路调控,研究认为TGF-β1是瘢痕疙瘩形成最关键的细胞因子,在瘢痕疙瘩形成过程中对多条信号通路均有影响。目前研究显示mTOR在TGF-β1的信号传导中发挥重要作用,mTOR信号通路可以影响蛋白质的合成,对细胞的增殖、分化都具有调节作用。mTOR信号通路介导多种肿瘤性疾病,而瘢痕疙瘩具有类似肿瘤的生长特点,属于良性实体瘤,因此在TGF-β1介导的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中,mTOR信号通路可能也发挥重要作用。本课题研究TGF-β1/mTOR信号通路在瘢痕疙瘩中的表达情况,同时研究Res在作用瘢痕疙瘩过程中对该通路的影响和有效作用靶点。实验目的研究瘢痕疙瘩中TGF-β1/mTOR信号轴中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等关键分子的表达情况,证实瘢痕疙瘩组织中该信号通路存在异常表达,同时证实Res对瘢痕疙瘩这一信号通路有影响,并且明确其作用靶点。实验方法本实验将瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞进行体外培养,对所培养细胞进行实验研究。实验分三组：正常皮肤组(normal组)研究人正常皮肤成纤维细胞,瘢痕疙瘩组(keloid组)研究瘢痕疙瘩成纤维细胞,白藜芦醇组(Res组)研究经Res作用的瘢痕疙瘩成纤维细胞。(1)免疫荧光技术观察瘢痕疙瘩成纤维细胞中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等关键分子的分布情况；(2) RT-PCR技术检测各组TGF-β1/mTOR信号通路中TGF-β1 mRNA、 PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA的表达情况；(3) Western-blot技术观察三组TGF-β1/mTOR信号通路中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等重要细胞因子的蛋白表达情况。实验结果免疫荧光结果表明瘢痕成纤维细胞中TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等关键分子在细胞核与细胞质中均有表达。RT-PCR检测结果显示：keloid组TGF-β1 mRNA、PI3K mRNA、 Akt mRNA、mTOR mRNA等表达均高于normal组(P<0.05);Res组TGF-β1 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA的表达均比keloid组低(P<0.05)。Western-blot检测结果显示：keloid组TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均高于normal组(P<0.05); Res组TGF-β1、PI3K、mTOR蛋白表达量均低于keloid组(P<0.05); Res组Akt蛋白表达量虽低于keloid组,但两组间比较无统计学差异(P>0.05)。实验结论瘢痕疙瘩中存在异常激活的TGF-β1/mTOR信号通路,且TGF-β1、PI3K、Akt、mTOR等为其关键分子,在瘢痕疙瘩中有高表达。Res对瘢痕疙瘩TGF-β1/mTOR通路中TGF-β1、 PI3K、mTOR等关键分子具有抑制作用,这可能是Res作用瘢痕疙瘩的重要机制。该研究为Res治疗瘢痕疙瘩提供了部分理论依据。