糖尿病肾病相关脂肪酸代谢研究

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本文以毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)方法为主要分析手段,建立了衍生化及非衍生化两种定量游离脂肪酸的分析方法,并且将非衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)内标定量法应用于测定糖尿病肾病患者药物干预前后血浆中游离脂肪酸水平。通过对患者体内十五种常见游离脂肪酸含量的分析,结合各类脂肪酸化合物生理学意义进行讨论,为阐述糖尿病肾病发病机理、发展与改进药效评价体系提供了有效的研究工具。本研究首先在目前公认文献方法的基础上,改进了甲酯化衍生的毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)方法。脂肪酸类化合物极性较强、沸点较高,通常不能直接应用于传统的GC-FID检测。因而,在样品前处理过程中,通过甲酯化反应,将游离脂肪酸转换为相应的脂肪酸甲酯,降低沸点,随后进行GC-FID检测。但衍生化GC-FID方法前处理较复杂,且由于衍生化反应需要高温,很难对沸点较低的短链游离脂肪酸进行定量。本研究随后发展了稳定的非衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)方法。此方法选用强极性毛细管气相色谱柱,能够直接对游离脂肪酸进行分离,简化了样品前处理步骤,避免引入额外误差,同时能够对衍生化GC-FID不能检测的短链游离脂肪酸进行定量。上述两种毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)方法定量分析了人体血浆中常见的游离脂肪酸。衍生化GC-FID方法以十五烷酸(C15:0)为内标,能够对血浆十四种游离脂肪酸定量;而非衍生化GC-FID方法以十七烷酸(C17:0)为内标,能够对血浆十五种游离脂肪酸定量。两种方法都通过方法学考查,验证了回收率、日内精密度、日间精密度、灵敏度、稳定性、与线性等。通过对十五种游离脂肪酸化合物采用非衍生化GC-FID内标法进行精确定量,实现了对人体中常见游离脂肪酸的定量分析。基于定量结果,通过纵断面分析揭示糖尿病肾病患者药物干预前后血浆游离脂肪酸含量的变化规律,并探讨了其生物学意义,揭示了糖尿病肾病和脂肪酸代谢的相关性,为糖尿病肾病的机理研究以及临床药效评价体系的建立与改进提供研究工具。
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