草兔（Lepus capensis）属兔形目（Lagomorpha），兔科（Leporidae），与穴兔属（Oryctolagus）的欧洲兔以及新西兰大白兔不同，属山兔属（Lepus），分布纵跨亚欧非三大洲。长期的进化历程演化出了它高繁殖率，广分布的特征，是一种适应性很强的哺乳动物，无论高山平原，严寒地带或是热带亚热带地区，甚至在极度干旱的戈壁和沙漠边缘都有它们的活动（罗泽珣1988；王应祥2003）。正是由于这些原因，导致草兔防治一直是世界性的难题。再加上近年来人为原因及自然灾害等因素的影响，使其的活动更加猖獗，给我国的林业、农业和牧业带来了极大的损失（杨学军等2005；王明春等2004）。然而目前的防治方法还停留在以控制死亡率为目的的传统方法上面，如机械捕杀、化学毒杀等方面，虽然这些方法短时间内在控制兔害方面起到了重要作用，但都存在工作量太大，费时费力、成本高、专一性差，靶特异性不强、灭效短和种群恢复快等缺点，而且化学毒杀法对环境的污染及公众的安全危害较大，难以大面积实施。随着公众对环保和动物权益等方面意识的增强，对有害生物防治提出了新的挑战和要求，因此亟需发展一种新型的控制方法，不仅要持续有效，而且要环保、人道。许多国家开始转变有害生物防治的策略，摒弃传统的通过提高死亡率来控制有害生物数量，取来代之的是通过减少出生率来控制其数量，应运而生的免疫不育技术则显示出了相当诱人的前景，特别适合像鼠（兔）类这样的全年大部分时间都能繁殖，生长发育快、性成熟早、妊娠期短、分娩后很快就能发情交配且单胎仔数多的有害生物治理。目前免疫不育已经成为国际上最有潜力的种群控制技术（陈东平和王晓2005；张知彬1995a，1995b）。草兔ZP蛋白是由卵巢卵母细胞及颗粒细胞合成分泌并包裹在成熟的卵母细胞和早期受精卵外的一层糖蛋白基质。精子与卵子接触时，精子先与ZP的特异受体位点结合，诱发顶体反应，完成受精过程，故ZP在受精过程中起着非常重要的作用。因此，ZP分子很合理地成了避孕疫苗开发的选择目标，ZP蛋白则被认为是一种很有开发前景的抗生育疫苗。本研究根据我们实验室已经克隆到的草兔ZP3序列（GenBank登录号为KC447289.1），分别设计去掉前端信号肽的ZP3片段（aa23~419）和同时去掉前段信号肽和后端跨膜区的ZP3核心片段（aa23~382），序列前段带有His标签，可与ZP3蛋白融合表达，方便后期蛋白纯化。将这两段序列分别构建到原核表达载体pET-28a（+）上，命名为pET-28a（+）-ZP3a和pET-28a（+）-ZP3b，转化BL21（DE3），然后同时诱导，SDS-PAGE和Western-bolt检测验证其成功表达，但跨膜区影响表达效果，带跨膜区的表达量明显不如去掉的跨膜区的高。进一步实验得到原核表达的最佳诱导条件为IPTG1.0mM，诱导时间4h，诱导温度为37℃，此时融合蛋白的表达量最高，但融合蛋白以包涵体的形式存在。为表达更接近于天然的ZP3活性蛋白，我们又构建了能在RK-13细胞和CHO细胞里融合表达GFP-ZP3的真核表达载体pEGFP-N1-ZP3，经转染RK-13和CHO细胞，倒置荧光显微镜下观察其表达量分别为65%～75%和55%～60%，RT-PCR分析、SDS-PAGE和Western-bolt检测，实验组有一条阳性带，而对照组没有，进一步证明了ZP3蛋白在体外成功表达。本研究为后期的草兔免疫不育研究提供了大量可利用的ZP3蛋白，同时也为其它有害生物免疫不育防治研究奠定了理论基础。