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研究目标:观察SCAPs的基本生物学特性,并比较自体SCAPs和PDLSCs两种细胞复合CGF促进比格犬急性一壁骨缺损的牙周再生的潜能。研究方法:1.体外研究:采用酶消化法分离培养SCAPs和PDLSCs;用CCK8和单克隆形成率检测SCAPs的生长情况并进行数据分析;流式细胞术鉴定SCAPs表面标志物:Stro-1、CD146、CD45;进行SCAPs成骨、成脂、成软骨三个方向的诱导鉴定;将两种细胞分别接种于线性排列的聚羟基乙酸PGA支架材料在静态张力下体外培养2周及生长情况的观察。2.体内研究:将体外静态张力下培养两周的SCAPs/PGA、PDLSCs/PGA复合CGF后植入比格犬口内的一壁骨缺损处。8周后取材,对标本进行固定、脱钙、常规脱水包埋,制作石蜡切片后作HE染色、Azan染色观察牙周组织愈合情况。实验结果:1.比格犬SCAPs和PDLSCs的分离培养、鉴定结果:酶消化法分离SCAPs和PDLSCs,可观察到两种细胞的克隆样贴壁生长,SCAPs克隆形成率为(8.99±2.44)%。CCK8结果显示SCAPs的增长曲线符合对数生长曲线,呈明显的“S”形。流式细胞术鉴定:SCAPs的Stro-1为(11.12±3.09)%、CD146为(10.57±2.22)%,造血干细胞标记物CD45不表达。多向分化能力检测SCAPs可以形成钙化结节和软骨基质,并可观察到有脂滴形成。SCAPs和PDLSCs接种到PGA支架上培养到两周,倒置相差显微镜下可观察到大多数SCAPs和PDLSCs黏附在PGA纤维上,并沿着纤维排列方向生长,分泌出了大量的细胞外基质附着在纤维上,形成组织工程化韧带样结构。2.比格犬急性一壁骨缺损再生手术后8周取材,愈合过程未见明显炎症或者排斥反应。组织学观察到牙龈上皮分化良好,未见明显溃疡或病变情况,形成良好的结缔组织附着,实验组缺损切迹以上均可见到有新骨形成,空白组形成的新骨量较少。类牙槽骨和牙槽骨之间有明显的分界,因为类牙槽骨的钙化程度低于牙槽骨,类牙槽骨内有丰富的血管存在,可以观察到牙槽骨嵴顶,个别标本出现了骨吸收。在大多牙周伤口愈合区域仍能看到未降解的材料,周围有致密的纤维包绕,实验组的骨内面可以看到丰富的胶原纤维伸入结缔组织,在无细胞牙骨质和新类牙槽骨间可以看到丰富的胶原纤维形成,类似于邻近的牙周膜纤维。组织学统计分析示:SCAPs/PGA/CGF、SCAPs/PGA、PDLSCs/PGA/CGF、PDLSCs/PGA四组的结缔组织量均少于空白组,差别有显著性;新生骨面积:SCAPs/PGA/CGF组和空白组比有明显差异;新生骨高度:SCAPs/PGA/CGF、SCAPs/PGA、PDLSCs/PGA/CGF、PDLSCs/PGA数值略高于空白组,但p>0.05。结论:SCAPs/PGA复合体体外可以构建工程化韧带结构,其和/或CGF均有良好的生物相容性,有促进牙周组织再生的潜能。