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本试验以“中蔬四号”番茄为材料,通过组织培养进一步优化不定芽的再生体系并建立高效的番茄快繁体系。采用携带双元表达载体pCAMBIA3301(含GUS基因和Bar基因)的农杆菌EHA105侵染番茄子叶,得到了转基因植株,为以后采用基因工程技术改良番茄性状奠定了基础。具体研究结果如下:1、以“中蔬四号”番茄为试验材料,通过对影响番茄子叶离体再生的相关因素进行研究,获得番茄离体再生的优化方案。幼苗获得的最佳方法是种子16h先用冷水浸泡,播种后暗培养约3 d至发芽,再转至光条件下培养,8-9 d即可获得无菌苗;另外通过胚也可以获得无菌苗,培养时间5 d,比种子缩短2 d,且幼苗与前者相似;对激素ZT和IAA进行过滤灭菌的效果优于高压灭菌;不同有机添加物对番茄子叶芽分化效果由高到低顺序为:N&N>DL>MES>MS;子叶中间段为诱导番茄不定芽的最佳外植体部位,旦背面向上放置于培养基上更有利于不定芽的诱导;在试剂方面,玉米素核苷(Zeatin Riboside购自Phyto Technology Laboratories-Z899)的效果优于玉米素(购自上海生物工程有限责任公司-ZB0747);最佳增殖培养基配方是MS+NAA 0.01 mg/L+6-BA 2.0 mg/L。2、为建立一套高效实用的快繁体系,从成苗时间、成苗数量、成苗成本三方面进行了研究,统计分析显示,由种子生长为无菌苗需要5 d;取子叶诱导愈伤和不定芽需要25 d;不定芽伸长需要10 d;伸长的芽经过7 d就可以生根;组培室炼苗3 d后蛭石中,生长3-7 d后移栽。从种子往移栽到大棚需要56 d,有效缩短了组织培养的周期;一块愈伤可诱导长出7株组培苗;一粒种子长成苗的成本约0.35-0.4元。3、对最佳选择剂PPT的浓度进行了筛选,诱导不定芽的PPT最适浓度为0.8 mg/L,生根PPT最适浓度为0.5 mg/L;绘制了菌株的生长曲线,二次活化的菌液振荡培养8 h进入对数生长期,10 h后进入稳定生长期,培养时间在8h~10h间的菌株活性高,利于侵染;采用农杆菌介导法获得了转基因植株,通过抗性植株的PCR检测,确定目的基因已整合到番茄基因组中,这为今后番茄的遗传转化奠定基础。