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目的:利用顺铂(cisplatin,DDP)构建顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞株TOV112D/DDP,并通过蛋白免疫印迹和免疫荧光细胞化学技术检测该耐药癌细胞人表皮生长因子受体Her2(human epidermal growth factor receptor2)的表达情况和相关信号通路中信号转导子和转录激活子-3(signal transducers and transcription activators3,STAT-3)的激活情况。探讨上皮性卵巢癌细胞的耐药性与Her2基因表达及其相关信号通路激活的关系。为临床耐药性卵巢癌的治疗奠定理论基础。 方法:1.顺铂耐药细胞的构建:采用微量递增的方法,利用顺铂构建顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞株(TOV112D/DDP);2.顺铂耐药细胞耐药性的评价:MTT实验检测耐药细胞株半数抑制率(half maximal inhibitory concentration of a substance,IC50),评价耐药细胞株的耐药性;3.顺铂耐药细胞中Her2的表达:利用蛋白免疫印迹(Western blot)和细胞免疫荧光组织化学技术(激光共聚焦扫描显微镜)检测上皮性卵巢癌细胞株 TOV112D及顺铂耐药细胞株 TOV112D/DDP中Her2的表达;4.顺铂耐药细胞 TOV112D/DDP中 STAT3的表达和激活情况:利用Western blot和激光共聚焦扫描显微镜检测上皮性卵巢癌细胞株TOV112D及顺铂耐药细胞株TOV112D/DDP中STAT3、p-STAT3的表达水平及分布情况。 结果:1.成功构建顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞 TOV112D/DDP,MTT检测结果得到TOV112D/DDP细胞对顺铂的耐药系数为4.1429;2.Western blot检测结果显示,与上皮性卵巢癌细胞TOV112D相比,耐药细胞TOV112D/DDP Her2表达明显上调,激光共聚焦扫描显微镜结果同样显示耐药细胞Her2的表达明显高于非耐药细胞。3.Western blot结果显示,与TOV112D细胞相比,耐药细胞TOV112D/DDP中stat3表达明显上调。激光共聚焦扫描显微镜检测发现,顺铂耐药细胞TOV112D/DDP中的STAT3较上皮性卵巢癌细胞TOV112D中显著上调,且顺铂耐药细胞的细胞核中STAT3表达上调尤为显著。4.激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,p-STAT3均主要表达于TOV112D和顺铂耐药细胞TOV112D/DDP的细胞核中,Western blot和激光共聚焦扫描显微镜结果均表明TOV112D/DDP细胞中p-STAT3表达较TOV112D细胞明显上调。 结论:1.成功构建耐药性上皮卵巢癌细胞 TOV112D/DDP。2.顺铂耐药细胞TOV112D/DDP中Her2表达较TOV112D细胞显著上调;3.顺铂耐药细胞TOV112D/DDP中STAT3表达较TOV112D细胞显著上调;4.顺铂耐药细胞TOV112D/DDP中STAT3激活水平即p-STAT3表达水平较TOV112D细胞显著上调。