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目的：1．建立正常大鼠视网膜和8周糖尿病大鼠视网膜基因差异表达谱，并通过生物信息学方法对表达谱进行分析，初步筛选糖尿病视网膜病变相关基因。2．进一步验证糖尿病大鼠视网膜组织中相关因子在mRNA水平和蛋白质水平上的表达变化，并对相关因子进行视网膜组织学定位，探索其在视网膜血管内皮细胞和神经细胞中的表达变化情况，为揭示糖尿病视网膜病变的病理机制提供依据。方法：1．SD大鼠腹腔注射四氧嘧啶制备糖尿病动物模型。采用限制片段差异显示聚合酶链反应(Restriction Fragment Differential Display-Polymerase Chained Reaction，RFDD-PCR)技术平行操作，建立正常视网膜及8周糖尿病大鼠视网膜两个基因表达谱。2．以7％尿素变性聚丙烯酰胺电泳进行表达差异基因片段的分离显示，结合http://www.Qbiogene.com/display/数据库资料，应用ImageTool，ImageQuant TL等软件，对各组织间有表达差异的基因进行生物信息学分析，筛选糖尿病候选基因。3．通过半定量RT-PCR、Real-time RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学技术进一步观察候选基因在8周糖尿病大鼠视网膜中的表达。结果：1．建立了糖尿病大鼠视网膜及正常大鼠视网膜基因表达谱：共获得有意义的表达片段3639个，包括DR：1826个，NR：1813个。有差异的片段840。与正常相比糖尿病状态下表达信号减弱的基因片段283个，增强的225个，消失的145个，出现的187个；2．差异表达谱生物信息学分析结果显示，糖尿病状态下：1)NOS：eNOS和nNOS表达有不同程度下调，iNOS表达明显上调；2)ET及ETR：ET-1、ET-3、ETRB和ECE表达均不同程度上调，ET-2和ETRA本次实验中未能检出；3)synuclein：α-synuclein表达明显上调，β-synuclein和γ-synuclein表达无变化。3．半定量RT-PCR结果显示：1)NOS：与正常视网膜相比，糖尿病8周大鼠视网膜eNOS和nNOS表达明显下调，iNOS表达明显上调；2)ET及ETR：与正常视网膜相比，糖尿病8周大鼠视网膜ET-1、ET-2、ET-3、ETRA、ETRB和ECE表达均明显上调。4．Real-time RT-PCR结果显示：与正常视网膜相比，8周糖尿病大鼠视网膜α-synuclein，β-synuclein和γ-synuclein表达明显上调。5．半定量Western Blot结果显示：1)3-NT和NOS：与正常视网膜相比，糖尿病8周大鼠视网膜eNOS和nNOS蛋白水平明显降低，3-NT和iNOS蛋白水平明显升高；2)ET及ETR：与正常视网膜相比，糖尿病8周大鼠视网膜ET、ETRA和ETRB蛋白水平均明显增强；3)α-synuclein：与正常视网膜相比，8周糖尿病大鼠视网膜α-synuclein蛋白水平均明显增强。6．免疫组织化学结果显示：1)3-NT和NOS：与正常视网膜相比，8周糖尿病大鼠视网膜中，INL的3-NT和iNOS免疫阳性细胞明显增多，INL和血管内皮层的eNOS阳性细胞明显减少，INL的nNOS阳性细胞也明显减少；2)ET及ETR：与正常视网膜相比，8周糖尿病大鼠视网膜中，ET、ETRA、ETRB免疫阳性细胞明显增多，增多的阳性细胞主要集中于INL，而在血管内皮层增多不明显；3)α-synuclein：与正常视网膜相比，8周糖尿病大鼠视网膜中，α-synuclein免疫阳性细胞明显增多，增多的阳性细胞主要集中于视网膜视锥视杆层。结论：1．RFDD-PCR技术可以检测出大量表达基因，适用于疾病差异表达谱分析，可以初筛疾病相关基因。2．8周糖尿病大鼠视网膜组织中，eNOS和nNOS的表达降低提示视网膜血管内皮细胞和神经细胞已受到损害，INL和GCL的3-NT免疫阳性反应的出现和iNOS表达的增强进一步提示8周糖尿病大鼠神经视网膜已受到NO的氧化损伤作用，视网膜发生了神经病变。3．在DR中，高糖使视网膜受到损伤，使其ET、ETRA、ETRB、ECE表达增加。其中神经视网膜受到的损害比血管内皮层更明显，ET、ETRA、ETRB在INL表达明显增强，在血管内皮层增加不明显。4．α-synuclein在8周糖尿病大鼠视网膜视锥视杆层的高表达提示，视网膜感光细胞已受到损害，神经视网膜已发生病变。