论文部分内容阅读
该论文对鸡和鸭性腺肽类激素抑制素／活化素的α、βA和βB亚基成熟区进行了克隆及序列分析，并采用非常灵敏的定量竞争RT-PCR技术对其及相关激素、因子和受体（卵泡抑素、WT1肿瘤抑制子、FSH受体）在卵泡中的表达丰度进行了研究，来探讨性腺肽类激素在卵泡中的调节机理。主要研究结果及结论如下： 萧山鸡／绍鸭成熟α亚基是由113／113个氨基酸（aa）残基组成的蛋白质，具有一个糖基化位点和七个半胱氨酸残基，与发表的鸡和哺乳类相应序列对比，其核苷酸序列的同源性分别为97-99％／91.25-92.31％和58.46-61.73％／60.86-63.41％，其预测氨基酸序列的同源性分别为96.46-99.12％／93.97-95.23％和57.78-61.94％／55.81-60.93％。 萧山鸡／绍鸭成熟βA亚基是由116／116个氨基酸（aa）残基组成的蛋白质，具有9个半胱氨酸残基，与发表的鸡及哺乳类相应序列对比，其核苷酸序列的同源性分别为99.72-100％／95.44-95.73％和83.48-86.04％／84.62-87.75％，其预测氨基酸序列的同源性分别为99.14-100％／99.14-100％和94.83-97.41％／95.69-98.28％。 萧山鸡／绍鸭成熟βB亚基是由115／115个氨基酸（aa）残基组成的蛋白质，具有9个半胱氨酸残基，与发表的鸡和哺乳类相应序列对比，其核苷酸序列的同源性为100％／99.43％和80.75-83.62％／80.75-83.91％，其预测氨基酸序列的同源性为100％／100％和95.69-98.28％／95.69-98.28％。 萧山鸡α亚基成熟区的糖基化位点及半胱氨酸残基的数目（7个）和位置与发表的鸡和哺乳类相似，βA和βB亚基成熟区半胱氨酸残基的数目（9个）和位置也与发表的鸡和哺乳类相同，说明抑制素／活化素各亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性，提示其可能具重要的生理功能。 鸡各级卵泡中α亚基mRNA表达丰度的定量分析结果显示，α亚基mRNA在小黄卵泡（SYF）中表达量最高，从SYF到F1中，随着卵泡的成熟α亚基的表达量降低，其在大卵泡和小黄卵泡中表达量较高，在大白卵泡（LWF）中表达量很低，说明α亚基在卵泡的吸收、选择及优势化过程中起着重要的调节作用。 对鸭各级卵泡中抑制素α和βA亚基的mRNA表达丰度研究显示，在各级卵泡中均有此两亚基mRNA的表达，大卵泡中的α亚基表达量要高于βA亚基。α亚基mRNA在小黄卵泡（AYF）中表达量最高，β?亚基mRNA在F1中表达量最高。随着卵泡的增大α亚基表达量隆低，βA亚基却增加，说明在卵泡发育过程中，α和βA亚基的表达是独立调节的，另外，βA亚基在F1中的大量表达，说明F1可能是形成二聚体抑制素和／或活化素的主要场所。 印泡抑素是与抑制素/活化素功能密切相关的一种糖蛋白激素，对鸭各级卵泡及成熟与禾成熟精巢中的卵泡抑素和抑制素/活化素日。亚基的mRNA表达丰度的研究显示，在上达组织中均有此两基因mR从的表达，且只在小卯泡中表达较丰富。卯泡抑素在小黄印泡、SYF)中表达量最高，已，亚基也在小黄卵泡中表达量最高。卵泡抑素和日。亚基叭阳的表达模式是相似的，二者在小卵泡中均出现大量表达说明活化素B（日。一氏）的生物活性可能受卵泡抑素的紧密调节，二者共同在卵泡早期发育中起重要作用。 分另，1用活化素（Activin）、耳尸泡抑素（FSP）及其组合（Activin+FSP）来处理培养的鸭未成熟卵泡颗粒细胞，发现在FSH存在与不存在的情况下，Ac t ivin均能促进FSH受体帆M的表达，且随着Act ivin浓度的增大，其刺激作用增强。FSP自身对FSH受体产生无显著作用，但能中和Ac〔ivin对该受体产生的促进作用。此结果说明FSP和Actlvi。对颗粒细胞具有自分泌作用，二者通过调节FSH受体mRNA的表达而在卵泡的生长发育过程中起着重要作用。 W丁1.、Wi〕ms月中瘤抑制子)是一具锌指结构的转录抑制子，对一些生长因子及其受体基因的转录起抑制作用。对绍兴鸭各级卵泡中wTlrnR以的表达情况研究显示，在各级印泡幸均有wTI mR以的表达，但只在小卵泡（大白卵泡和更小卵泡）中表达丰富，在，卜黄印泡及较大卵泡中表达量极低，说明WTI在卵泡的早期发育中起作用，它很可能通过抑制那些刺激卵泡生长分化的生长因子及受体基因的转录来阻滞早期卵泡的生长。