大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测

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背景:一些研究者利用超顺磁性氧化铁对血管内皮祖细胞进行标记,但是,对于超顺磁性氧化铁标记血管内皮祖细胞后,对其存活、增殖及凋亡是否有影响研究较少。目的:研究大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCS)的分离、培养、SPIO标记,SPIO对EPCS的标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响,为进一步实验研究奠定基础。方法: SD大鼠体重120g ~150g,采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠EPCS,采用25μg/mL SPIO对其标记,比较标记和未标记的EPCS:普鲁士蓝染色观察铁标记率;台盼蓝检测细胞活力;MTT法检测细胞增殖活力;Calcein-AM/PI染色检测细胞活性及细胞膜完整性;AO/PI染色检测细胞凋亡率。结果与结论:分离培养EPCS7~10 d,细胞集落相互连接,呈典型的铺路石样外观。普鲁士兰染色显示SPIO(25μg/mL,24 h)对细胞的标记率接近94%;比较SPIO标记及未标记的EPCS:细胞活力分别为94.34%±0.25%和95.33%±0.31%;MTT法检测两组间相比差异无统计意学义(P>0.05);Calcein-AM/PI染色检测细胞的活性和膜完整性,存活率分别为96%和97%;AO/PI染色两组细胞的凋亡率均为5%。采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养;25μg/mL浓度的SPIO细胞标记率高,对细胞毒性小,且不影响EPCS的活力、增殖及凋亡。
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