【摘 要】
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【目的】明确NDR1在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织及多种口腔鳞状细胞癌细胞系中的表达水平,探究高表达NDR1对OSCC细胞系迁移、侵袭和增殖能力的影响,并深入探讨其抑制OSCC迁移侵袭能力可能的分子生物学机制。【方法】采用实时定量逆转录聚合酶链反应（q RT-PCR）方法检测NDR1在口腔鳞状细胞癌组织、对照组织及4株口腔鳞状细胞癌细胞系（SCC9,SCC15,SCC25和CAL27）和正常上皮
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【目的】明确NDR1在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织及多种口腔鳞状细胞癌细胞系中的表达水平,探究高表达NDR1对OSCC细胞系迁移、侵袭和增殖能力的影响,并深入探讨其抑制OSCC迁移侵袭能力可能的分子生物学机制。【方法】采用实时定量逆转录聚合酶链反应（q RT-PCR）方法检测NDR1在口腔鳞状细胞癌组织、对照组织及4株口腔鳞状细胞癌细胞系（SCC9,SCC15,SCC25和CAL27）和正常上皮细胞系（HOK）中的表达水平。利用高表达质粒上调口腔鳞状细胞癌SCC9细胞系中NDR1的表达水平,同时构建高表达NDR1的腺相关病毒上调口腔鳞状细胞癌CAL27细胞系中NDR1的表达水平,在利用western blot方法分别验证其高表达效率后,进一步利用划痕实验和transwell小室实验检测高表达NDR1组及对照组细胞的迁移和侵袭能力的差异;通过Ed U增殖实验检测两组细胞的增殖能力差异。在分别对SCC9和CAL27细胞进行双免疫荧光染色检测NDR1激酶与中心体的位置关系后,利用免疫荧光显微镜实验检测细胞中心体发生重定向的细胞比例,从而验证NDR1激酶是否通过改变细胞中心体重定向来影响OSCC细胞的迁移能力。【结果】q RT-PCR结果显示NDR1在口腔鳞状细胞癌组织中m RNA的表达量明显低于癌旁组织（P＜0.001）;而在4株口腔癌细胞系SCC9、SCC15、SCC25和CAL27中NDR1的m RNA表达水平明显低于正常口腔角质细胞系HOK（SCC9,P＜0.001;SCC15,P＜0.001;SCC25,P＜0.001;CAL27,P＜0.01）。进一步通过高表达质粒对SCC9细胞进行瞬转,通过高表达的腺相关病毒对CAL27进行感染,并利用western blot方法检测高表达NDR1组中NDR1蛋白表达水平明显高于对照组。划痕实验结果显示,相比对照组,高表达NDR1组的SCC9和CAL27细胞迁移能力明显减弱（SCC9,P＜0.001;CAL27,P＜0.001）;Transwell迁移实验结果也提示,相比对照组,高表达NDR1组的SCC9和CAL27细胞迁移能力明显减弱（SCC9,P＜0.01;CAL27,P＜0.01）。Transwell侵袭实验结果提示,相比对照组,高表达NDR1组的SCC9和CAL27细胞侵袭能力明显弱于对照组（SCC9,P＜0.05;CAL27,P＜0.01）。利用Ed U增殖实验检测在高表达NDR1后,与对照组相比,SCC9和CAL27细胞的增殖能力显著降低（SCC9,P＜0.001;CAL27,P＜0.01）。利用双免疫荧光染色发现,NDR1激酶在中心体处出现聚集。在对细胞中心体重定向的研究中,通过免疫荧光结果比对发现,高表达NDR1的SCC9和CAL27细胞较对照组相比,中心体重定向的细胞比例显著降低（SCC9,P＜0.05;CAL27,P＜0.0001）。【结论】NDR1的m RNA表达量在OSCC患者组织和细胞中表达量均下降。体外高表达NDR1后,口腔鳞状细胞癌的迁移和侵袭能力均降低,增殖能力明显减弱。NDR1可能通过调控特定的信号分子通路来降低中心体的重定向,从而抑制OSCC细胞的迁移及侵袭的能力。NDR1作为一个潜在的分子靶标,可能在抑制口腔鳞状细胞癌的进展方面发挥一定的作用。
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