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糖尿病是人类三大慢性疾病之一,以Ⅱ型糖尿病居多。Ⅱ型糖尿病主要是由于机体的胰岛素抵抗作用进而导致全身能量代谢紊乱的疾病,患者在患病后期会出现糖尿病肾病、心脏病等并发症,严重威胁人类健康。近年来研究发现,小分子miRNAs能够参与Ⅱ型糖尿病的调控。本研究的目的是测定广西巴马小型猪miRNAs的组织表达谱;对广西巴马小型猪Ⅱ型糖尿病模型不同组织：niRNAs的表达差异进行分析；探讨miR-103/107在体外和体内对Ⅱ型糖尿病的调控机制,为人类糖尿病的研究、治疗提供新的靶点。参照miRBase公布的miR-103、107、122、143-5p基因序列,设计特异性的扩增引物,克隆广西巴马小型猪miR-103、107、122、143-5p基因的成熟序列。利用实时荧光定量PCR测定巴马小型猪miRNAs的组织表达谱。结果显示巴马小型猪miR-103、107、122、143-5p与miRBase公布的猪、人类、小鼠、绵羊、鸡等物种序列一致,未出现碱基突变；miR-122在肝脏组织中特异性的表达,且表达量显著高于其他miRNAs(P<0.05);miR-103、107、143-5p在肝脏、骨骼肌、脂肪组织中均有表达,且miR-103在骨骼肌和脂肪组织中的表达量显著高于miR-143-5p和miR-122(P<0.05)。通过实时荧光定量PCR的方法测定T2DM模型发病组、未发病以及对照组的肝脏、骨骼肌、脂肪组织中miR-103、107、122的表达水平,结果显示发病组肝脏组织中miR-122的表达量上调,miR-103/107在发病组三个组织中的表达量均上调。因此筛选miR-103/107进行后续研究。利用miRDanda、Targetscan网站以及文献报道预测miR-103/107能够与人和小鼠Caveolin-1基因的3’UTR区结合,存在三个结合位点,与NCBI公布的猪Caveolin-1基因序列进行比对,猪Caveolin-1基因3’UTR区存在一个miR-103/107结合位点。本试验克隆巴马小型猪Caveolin-1基因包含3’UTR区域的1885 bp基因序列,与GenBank中公布的猪Caveolin-1基因3’UTR序列比对,结果显示巴马小型猪Caveolin-1基因3’UTR存在8处碱基突变,1处碱基缺失,1处碱基插入,同源性为99.6%,巴马小型猪Caveolin-1基因3’UTR序列在1658-1715 bp存在一处miR-103/107的结合位点。本试验构建pEGFP-C1-pre-103、pcDNA3.1(+)-EGFP-pre-103、pEGFP-C1-pre-107、 pcDNA3.1 (+)-EGFP-pre-107真核表达载体,转染小鼠成肌细胞C2C12,实时荧光定量PCR检测miR-103/107、Caveolin-1基因在细胞内的表达情况。结果显示C2C12细胞内转染pEGFP-C1-pre-103、 pcDNA3.1(+)-EGFP-pre-103真核表达载体后miR-103的表达量上调,C2C12细胞内转染pEGFP-C 1-pre-107、pcDNA3.1(+)-EGFP-pre-107真核表达载体后miR-107的表达量上调；在C2C12细胞内过表达miR-103/107后,Caveolin-1基因的表达量均下调。结果表明,在体外过表达miR-103/107能够直接抑制靶基因Caveolin-1的表达水平。采用实时荧光定量PCR测定巴马小型猪T2DM模型肝脏、骨骼肌、脂肪组织中Caveolin-l的表达水平。结果表明,巴马小型猪发病组Caveolin-l在三个组织中的表达量均下调。对巴马小型猪T2DM模型中发病组和未发病组Caveolin-l基因与miR-103/107的结合区域进行PCR扩增并测序,结果显示在Caveolin-l基因与miR-103/107结合区域的1683 bp位点存在A/T突变,发病组有AA基因型猪3头、AT基因型猪3头,未发病组AT基因型猪1头、TT基因型猪2头。综上所述,巴马小型猪T2DM模型发病组肝脏组织miR-122表达量上调；miR-103/107在发病组肝脏、骨骼肌和脂肪组织中的表达量均上调。miR-103/107表达量的上调,可以直接作用于靶基因Caveolin-l基因的3’UTR区,抑制靶基因Caveolin-l基因mRNA水平的表达。Caveolin-l基因与miR-103/107结合区域内1683 bp位点的A/T突变可能与Ⅱ型糖尿病的易感性有关。