粟酒裂殖酵母trz2基因表达和mtf2基因影响线粒体基因组表达的研究

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在真核生物中,线粒体基因组与核基因组在生物发生和合成方面相互协同合作。线粒体基因转录、RNA加工和翻译都需要不同的核基因蛋白参与。粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中有两个线粒体蛋白Trz2和Mtf2。它们是核基因编码蛋白,并且在线粒体中扮演着重要的角色。我们实验室之前证明了 Trz2参与S.pombe线粒体的tRNA前体、mRNAs和rRNAs的加工。之前也证明了高表达SpTrz2p影响了细胞周期,并且细胞会出现致死现象。本研究利用trz2温敏型菌株yHD1在非发酵培养基的生长状态,了解了 SpTrz2p对线粒体的功能影响。通过SpTrz2p和SpTrz2p-N端多克隆抗体检测出SpTrz2p是低表达蛋白。运用5’RACE方法,确定了trz2基因的转录起始位置距离起始密码子60 bp。通过lacZ报告基因的酶活测定,发现trz2基因的启动子上有一个抑制区域URS(-111到-54)。实验证明了rrn7基因过表达是会上调HomolD介导trz2的转录。还通过信息学分析,说明了 HomolD box在四个裂殖酵母中的trz2启动子里是进化保守的。TATA box作为基础元件,URS作为抑制序列和HomolD box作为正调控元件共同参与trz2基因的表达调控。芽殖酵母蛋白Mtf2参与线粒体RNA的加工和翻译。而且pombe线粒体同源蛋白Mtf2是一个未知蛋白。本研究通过观察敲除mtf2的S.pombe菌株的细胞形态和测定其生长曲线,了解了敲除mtf2菌株的生长特点。通过其在非发酵培养基中出现缺陷生长现象,推测S.pombe线粒体蛋白Mtf2与线粒体的功能有关。并且通过实时荧光定量PCR、35S标记和免疫印迹实验,揭示了敲除mtf2的S.pombe菌株的线粒体基因组的mRNA水平和蛋白质水平都受到了影响。证明了裂殖酵母mtf2基因参与了线粒体基因组的表达调控。
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