bFGF慢病毒载体的构建及其在骨髓充质干细胞中的稳定表达

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目的:周围神经的损伤修复作为骨外科中一直以来尚未解决的难题之一,本实验是基于上述理论的基础研究,目的是通过在体外对Wistar大鼠骨髓间充质干细胞进行提取、培养及鉴定,并将bFGF基因转染至BMSCs中得到稳定表达,揭示bFGF对BMSCs的作用。通过上述研究实现bFGF基因在大鼠BMSCs的稳定表达以及基因表达量的可调控性,为下一步研究bGFGF修饰的BMSCs进行神经损伤修复研究奠定实验基础。方法:本实验分为两部分,第一部分实验是对大鼠进行骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定,在此实验中我们观察到了分离细胞的形态,将其传代培养,并描绘生长曲线,利用BMSCs的表面抗原标记物对其鉴定,加入不同的诱导基进行成脂和成骨分化,结果证实所得细胞为大鼠BMSCs。第二部分实验中,通过构建bFGF慢病毒载体,应用慢病毒包装试剂盒将上述慢病毒载体在293T细胞内包装成病毒颗粒,再将病毒颗粒感染大鼠骨髓间充质干细胞,获得了稳定转染表达bFGF的BMSCs,为进行下一步试验将稳定转染表达bFGF的BMSCs通过局部用药或直接注射到神经损伤动物模型体内以达到修复的目的奠定了基础。结果:本实验成功分离、培养并鉴定了大鼠BMSCs;成功构建了bFGF慢病毒载体;成功将慢病毒载体包装完成慢病毒颗粒;最后成功获取了bFGF稳定表达的BMSCs。在这一系列的实验中,掌握了大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定方法,测定了bFGF慢病毒载体颗粒转染大鼠BMSCs的数目,为下一步实验研究提供实验和理论依据。
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