电致化学发光免疫传感器是一种将电致化学发光技术与免疫学分析方法相结合而发展起来的具有高灵敏度、高选择性、低背景等特点的生物传感器。免疫生物传感器敏感界面上生物识别系统的构建是将生物识别事件转化为可检测物理化学信号的关键。利用化学、材料及生物等多种技术放大并特异性转化与免疫反应有关的检测信号,是实现传感器超灵敏检测的有效方法。本文针对电致化学发光信号探针联吡啶钌因水溶性强、分子结构无官能团可共价交联而难于固载标记的缺点,以复合纳米材料为载体,用掺杂、吸附或包埋联吡啶钌的方法增加联吡啶钌固载量,并标记抗体；采用不同的信号放大策略及巧妙的检测策略构建信号增强型及多组分检测型电致化学发光药物及免疫传感器。研究工作分为以下几个部分：1.多壁碳纳米管和联吡啶钉/纳米金复合纳米球为有效基质自组装构建新型固相电致化学发光药物传感器研究利用纳米金及多壁碳纳米管等纳米材料比表面积大、导电性好,可增加联吡啶钉固载量并有效增加单位时间内光量子激发态数量,放大Ru(bpy)32+ -TPrA体系电致化学发光强度的特点,我们新制备了联吡啶钌掺杂纳米金的纳米球颗粒用于固相电致化学发光传感器构建,并将该传感器用于对苦参碱药物的定量测定。该部分研究工作,成功通过定量计算对比不同纳米颗粒修饰电极的电活性比表面积,探讨不同纳米颗粒对电致化学发光传感器性能的贡献,实现了电致化学发光性能的定量分析。实验结果表明多壁碳纳米管与纳米金相比,多壁碳纳米管能为修饰电极提供更大的电活性比表面积,更有利于联吡啶钌固相电致化学发光。将多壁碳纳米管与纳米金结合构建的固相电致化学发光传感器具有更高的灵敏度,其对苦参碱线性响应范围为2.0 X 10-6-6.0X 10-3 mol·L-1,最低检测限为0.7μmol·L-1。2.联吡啶钌掺杂二氧化钛纳米颗粒标记抗体构建超灵敏电致化学发光免疫传感器研究该部分研究工作,以TiO2纳米颗粒作为免疫标记载体,利用TiO2半导体纳米材料比表面积大,能降低光量子激发态能垒,有助于增强电致化学发光的优点,制备了Nafion包裹的TiO2复合纳米颗粒,将联吡啶钉分子通过阳离子交换作用固载在纳米颗粒表面,并利用Nafion嵌套抗体,将信号探针联吡啶钌标记到抗体上。该方法巧妙的运用联吡啶钌掺杂TiO2复合纳米颗粒既固载探针又标记抗体,解决了联吡啶钉无官能团可交联标记的缺陷,同时利用纳米颗粒大比表面积增加了联吡啶钉的标记量,从而放大检测信号,提高免疫传感器灵敏度。实验结果表明目标ECL免疫传感器对HCG抗原有较灵敏的分析表现,线性范围是0.02-25 mIU·mL-1,最低检测下限是0.007 mlU·mL-1 (S/N=3).3.基于电位控制小麦状银颗粒高效催化联吡啶钌发光构建信号增强型电致化学发光免疫传感器的研究我们用循环伏安扫描法制得一种新的小麦状银颗粒,并发现该颗粒在-0.4-1.25 V电位下,当发生Ag+/Ag氧化还原时,对联吡啶钌的电致化学发光有明显增强作用,我们将此作为信号放大步骤之一用于构建ECL免疫传感器。同时,利用Pt纳米颗粒掺杂及亲和素/生物素多位点耦联技术增加联吡啶钌分子在二抗上的标记量作为又一信号放大步骤。二者联用以多级放大免疫检测信号,提高传感器灵敏度。实验结果表明该免疫传感器在0.01-20 ng-mL-1范围内对IgG抗原有较好的线性响应,检测限为3 pg-mL-1 (S/N=3)。在这一没有共反应试剂的ECL体系中,Ru(bpy)32+发光信号通过DpAg纳米颗粒催化,Pt纳米材料掺杂及亲和素/生物素多位点耦联得以充分放大。4.脂质体包裹增强信号小分子做为传感和放大平台结合适配体传感器用于超灵敏电致化学发光免疫测定我们成功地合成了包裹可卡因分子的脂质体纳米颗粒,联合免疫脂质体可放大水溶性信号物标记量,适体链可特异结合识别小分子的特点,将这两种高灵敏高特异的生物分析技术相结合通过多级放大用于电致化学发光免疫分析。实验选择对联吡啶钉发光有增强作用的小分子-可卡因作为信号报告物,利用包裹可卡因分子的免疫脂质体建立与可卡因浓度相关的免疫检测平台,然后利用可卡因对联吡啶钉发光信号的增强作用,通过新设计的特异识别可卡因的适配体传感器检测从免疫脂质体释放的可卡因浓度,从而间接实现对免疫抗原的定量检测。该检测策略避免了水溶性联吡啶钌的固载,通过脂质体放大信号报告分子可卡因的量,再通过可卡因对联吡啶钉的共反应试剂作用增强联吡啶钌发光,实现免疫检测信号的特异性多重放大。该多种放大技术联用的超灵敏免疫检测策略用于心衰标志物NT-proBNP检测,检测限可达0.77pg-mL-1。5.基于多组分肿瘤标志物同时检测的电致化学发光免疫传感器研究我们最新的研究发现过硫酸根S2O82-除了文献报道的可以增强联吡啶钌阴极发光外,其本身在电位-1.4 V也有电致化学发光。我们成功地将S2O82-的阴极发光与联吡啶钌的阳极发光相结合,以脂质体为免疫标记载体,将联吡啶钌和过硫酸钾分别用脂质体包裹并分别标记到两种不同肿瘤标志物上,按夹心反应模式构建多种肿瘤标志物同时检测的电致化学发光免疫传感器,初步探索用电致化学发光技术在同一敏感界面实现多组分的同时组装同时检测。实验结果表明S2O82-标记抗体对应的AFP抗原检测线性响应范围为20-250 ng-mL-1,检测限为6.7ng·mL-1 (S/N=3), Ru(bpy)32+标记抗体对应的CEA抗原检测线性响应范围为5～150 ng·mL-1,检测限为1.6 ng-mL-1 (S/N=3)。由于溶解氧及联吡啶钌对S2O82-阴极发光的影响,S2O82-标记抗体对应的检测信号更大,故得到的对应AFP抗原检测限更低。