背景心血管疾病的发病率逐年上升,一直威胁着人民的健康。心脏外科中大于6mm的组织工程血管（大口径血管）已经取得了突破并应用于临床,但是在冠状动脉旁路移植这类手术中所用到的直径小于6mm的组织工程血管（小口径血管）替代品却一直没有问世,这类血管需求量大,但是目前仍旧以患者自体的血管替代为主。脱细胞血管具有天然的血管基础,具有潜在的临床应用价值,但其生物相容性和抗凝血能力有待提高,本课题因此而设计出来。目的制备出脱细胞小口径血管支架,用聚多巴胺结合比伐芦定对其进行修饰,增强脱细胞血管支架的力学性能与抗凝血性能,评价该血管支架的体外力学性能、细胞相容性、免疫反应和抗凝性能,进一步对其皮下包埋评价体内降解性及移植后的体内重塑,以期制备出具有良好血液相容性、细胞相容性、低免疫原性的新型小口径血管替代物。方法1.取新鲜SD大鼠腹主动脉（直径2mm左右）,反复冲洗,然后浸泡在含有青霉素、链霉素和两性霉素B的PBS中。在超净工作台上清洁和修剪SD大鼠腹主动脉,随后随机分为三组。天然组:即未经实验处理过的SD大鼠腹主动脉;脱细胞组:即我们将修剪后的天然血管用Triton X-100进行脱细胞处理。然后将脱细胞后的血管支架置于预先制备的2%明胶溶液和EDC/NHS交联剂中进行交联。比伐芦定组:即在脱细胞组的基础上,在血管支架内填充多巴胺溶液,两端密封,然后置于无菌黑暗环境中沉积形成聚多巴胺涂层后,将比伐芦定溶液密封在血管支架内,并与聚多巴胺充分接触形成涂层,形成比伐芦定修饰的脱细胞血管支架。2.对制备好的脱细胞血管支架进行组织学染色（HE染色、Masson染色）观察其形态的改变;对其爆破压力、顺应性及拉伸强度进行评价;通过与间充质干细胞的混合培养、材料的细胞毒性试验、抗凝血相关指标测定、免疫荧光染色、实时荧光PCR技术和支架炎性反应评价其体外细胞相容性和血液相容性等生物学性能。3.将血管支架包埋在SD大鼠皮下,对其进行5周的体内降解情况进行分析。通过移植支架至SD大鼠体内3个月后,通过扫描电子显微镜观察移植物腔内情况,定量数据分析血管移植物的堵塞率和通畅率,检测支架移植后的力学性能变化,对移植物进行HE染色、收缩和舒张测试、钙化评估,通过抗CD34免疫组化染色评估新生血管情况。对移植物进行免疫荧光实验分别观察宿主内皮细胞和平滑肌细胞的迁移和增值覆盖情况及体内的炎性因子表达。结果1.我们对血管支架进行了详细的表征。HE染色显示脱细胞组和比伐芦定组没有细胞残留。Masson染色显示脱细胞组和比伐芦定组的胶原纤维和弹性纤维基本保持完整,通过对两组的胶原含量测定表明胶原被保留。我们还测试了脱细胞组和比伐芦定组的力学性能,结果表明两组的血管顺应性和拉伸强度无明显差异,但这些力学性能比天然血管降低。DNA定量分析表明细胞已被完全去除,材料表现出低免疫原性。2.我们通过MTT法评估了脱细胞组和比伐芦定组血管支架的细胞毒性,结果显示比伐芦定组的更低。将两组血管支架分别与BMSCs共同培养并通过免疫荧光染色观察两组BMSCs生长情况,结果也证实了比伐芦定组细胞活力更好。这些都说明比伐芦定修饰的脱细胞血管的血液和生物相容性更优。3.通过体外抗炎和促炎的相关表达,我们发现,随着时间的推移,脱细胞组和比伐芦定组血管支架都促进了巨噬细胞从促炎表型的巨噬细胞向抗炎表型的巨噬细胞的分化,这种趋势在比伐芦定组中更为明显。我们又将两组植入大鼠皮下来评估支架的组织相容性。通过5周的降解测定并没有发现两组有明显差别。皮下植入第2周后,通过病理染色,我们发现比伐芦定组血管支架的免疫反应较低。4.移植3个月后通过组织学染色发现脱细胞组和比伐芦定组移植物中都有宿主细胞覆盖,通过免疫荧光染色进一步发现内皮细胞和血管平滑肌细胞在比伐芦定组移植物中迁移、浸润更多。对伐芦定组移植物进行扫描电镜显示有内皮化,对移植物进行收缩舒张刺激表明该移植物具有一定的血管功能,免疫组化证实了比伐芦定组中血管密度更高并且钙化面积相对较低于脱细胞组。结论1.我们成功制备并探讨了比伐芦定修饰的脱细胞小口径血管支架的体外评价。发现比伐芦定修饰的脱细胞血管具有较好的血液相容性、低免疫原性、生物相容性和良好的力学性能。它比传统的脱细胞血管更具有优势。2.我们发现比伐芦定修饰的脱细胞小口径血管支架具有良好的宿主细胞亲和力,可以内皮化,并具有一定的新生血管能力,可能成为一种潜在的小口径血管移制替代物,为构建小口径血管移植物提供了一种新的思路。