马流感(Equine influenza,EI)是由马流感病毒引起的一种急性、高度接触性的马属动物呼吸道传染病。近年来,随着国际马术赛事的蓬勃兴起以及马属动物流动范围扩大等原因,致使EI在全球上频繁暴发、流行并由此对赛马业等构成了严重威胁。因此,从分子水平上阐明EIV H3N8亚型的流行规律,不仅在病毒学研究领域中有重要的学术意义,而且对EI防控也具有实用价值。本研究先将内蒙古株A/equine/Inner Mongolia/8/08(H3N8)在SPF鸡胚中增殖,提取病毒核酸,根据EIV 8个基因片段的3’末端高度保守的核苷酸序列特点,设计一条反转录引物,根据GenBank已发表的H3N8亚型EIV 8个基因的cDNA序列,利用Oligo6.0设计并合成14对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增出8个基因的序列片段,将它们连接到pMD18-T载体上。序列测定及分析结果显示,EIV 8个基因的cDNA包含该病毒完整的开放阅读框,与美洲株Kentucky/02的同源率最高,HA,NA,NP,NS1,NS2,M1,M2,PA,PBl,PB2基因核苷酸序列的同源性分别为98.7%,99.0%,99.1%,99.5%,99.4%,97.5%,97.4%,98.7%,98.8%,99.2%,两者各基因有着相似的遗传演化过程。本研究将全长700bp的NS1基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中,经双酶切鉴定为阳性的重组质粒再转化到感受态细胞BL21(DE3)中,挑选含重组质粒pET-NS1的菌落,经SDS-PAGE分析表明,用IPTG(终浓度为0.8mmol/L)诱导培养5h,pET-NS1融合蛋白表达量达到高峰,以包涵体形式存在,目的蛋白与载体上的标签蛋白融合后大小约为46kDa,与理论值相符。Western-blot分析表明,融合蛋白能与H3N8亚型马流感病毒感染马阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。