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前言：FANCF作为FA/BRCA通路的重要调控蛋白,参与正常细胞DNA修复、细胞周期与凋亡调控、解毒功能调节、生命信号转导等。如果FA/BRCA通路受损会导致细胞染色体不稳定以及对DNA损伤剂高度敏感。FA复合体的稳定和FANCD2的泛素化激活是FA/BRCA通路的关键步骤,如果FANCF蛋白低表达或功能缺失,则会干扰FA/BRCA通路的正常功能,进而参与肿瘤的发生与发展。目前,已在多种实体肿瘤中证实:FANCF蛋白低表达或功能缺失,与肿瘤的发生、发展相关。而关于。FANCF是否参与卵巢癌发生、发展尚未见报道。
本实验以FANCF基因为靶点,研究FANCF基因沉默对卵巢癌OVCAR3细胞生物学特性的影响,并检测相关指标的变化,探讨FANCF基因是否参与卵巢癌的发生、发展的调控,为卵巢癌发生、发展的研究提供新的思路。
方法：应用小提中量试剂盒提取质粒,脂质体法转染到人卵巢癌OVCAR3细胞中,RT-PCR法及Western blot法检测FANCF基因mRNA及蛋白表达水平,确认OVCAR3-FANCF-RNAi细胞模型构建成功;分别采用MTT法、流式细胞仪PI单染法及AnnexinV-FITC/PI双染法检测FANCF基因沉默前后细胞增殖、周期及凋亡等生物学特性的变化。
结果：
一、成功构建OVCAR3-FANCF-RNAi细胞模型:与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA质粒后,FANCF基因mRNA及蛋白表达水平均明显降低,转染后24h、48h及72h,FANCF mRNA表达抑制率分别为28.66％±5.91％、47.97％±10.91％、58.80％±11.10.80％(P＜0.05);蛋白表达抑制率分别为23.51±5.46％,33.24％±6.85％,38.65％±8.26％(P＜0.05),说明干预FANCF基因48h、72h时能显著抑制mRNA及蛋白表达,OVCRA3-FANCF-RNAi细胞模型成功建立。
二、FANCF基因沉默对卵巢癌OVCAR3细胞生物学特性的影响:
1、FANCF基因沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响:与阴性对照组相比,FANCF基因沉默后,细胞增殖明显受到抑制。转染后48h和72h,细胞增殖抑制率分别为28.92％±6.81％、40.72％±8.63％(P＜0.05)。
2、FANCF基因沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞周期的影响:与阴性对照组相比,FANCF基因沉默后,细胞S期比例明显增加。转染后48h和72h,OVCAR3细胞S期比率分别为29.14％±6.26％、33.52％±7.72％(P＜0.05)。
3、FANCF基因沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞凋亡的影响:与阴性对照组相比,FANCF基因沉默后,细胞早期凋亡及晚期凋亡均明显增加,转染后48h和72h,OVCAR3细胞凋亡率分别为25.90％+4.12％、37.78％±9.16％(P＜0.05)。
结论：FANCF基因沉默可抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖,诱导细胞凋亡;并使卵巢癌细胞S期比例增加。