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植物寄生线虫是植物病害的重要病原物之一,其寄生范围广,对全世界农作物生产构成了严重威胁。第一代线虫生防因子为活菌制剂,受环境影响较大;第二代线虫生防因子制剂多为脂溶性,水中溶解度差,实际应用困难。本实验室筛选出的丝状真菌Syncephalastrum racemosum,其发酵液具有很强的杀线虫活性,且为酸性、耐热,这与Syncephalastrum racemosum产的天冬氨酸蛋白酶syncephapepsin的酸性蛋白属性相一致,因此有必要研究该酶是否在Syncephalastrum racemosum代谢产物杀线虫过程中发挥作用。 本论文通过RT-PCR方法克隆了总状共头霉的天冬氨酸类蛋白酶基因,并选择了四种pET载体,在大肠杆菌中进行了原核表达,主要研究结果如下:1.以总状共头霉(Syncephalastrum racemosum)菌株总RNA为模板,通过RT-PCR方法,获得了去除自身信号肽的天冬氨酸类蛋白酶syncephapepsin基因。2.构建了克隆载体pUC18-SPSR,并对SPSR基因进行了序列测定。经过分析,得到了该基因片段的序列,大小为656bp。通过BLAST比对,与天冬氨酸蛋白酶syncephapepsin基因同源性达到90%。3.选择了pET载体系统中的四种载体:pET-22b(+)、pET-28a(+)、pET-30a(+)、pET-40b(+),分别构建了表达载体。经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,该蛋白大小约为38KDa,并已成功表达。结论为:构建了pUC18-SPSR克隆载体和四种pET载体,使用大肠杆菌表达系统可成功表达syncephapepsin,为今后的真核表达奠定基础。