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本论文的研究目的是利用基因工程手段培育具有生物安全性的转植酸酶基因大豆,使其降解植酸,释放无机磷,从而使转基因大豆成为高附加值的动物饲料,提高单胃动物对磷的利用率,降低植酸磷对环境的污染。
本论文构建了仅由外源植酸酶基因、调控序列以及两侧的边界序列组成的线性化片段转化元件,去除了选择性标记基因和载体骨架序列,并采用花粉管通道法对4个大豆品种进行转化,收获162粒种子。PCR检测99株植株,阳性17株,阳性率为17.2%。
PCR产物测序与Southern—blot结果证明外源植酸酶基因已经整合到大豆基因组中。RT—PCR和GUS组织化学染色结果说明外源基因在植株内实现了表达。
T2代和T3代植株进行PCR扩增和Southem—blot分析结果证明外源基因已在后代中得到遗传。RT—PCR和植酸酶活性的初步测定说明外源基因已在后代中实现了表达。
上述结果表明,无载体无选择标记基因线性化片段转化大豆是可行的,解决了选择标记基因和载体骨架序列带来的安全隐患并获得了转植酸酶基因大豆材料,为选育出植酸酶转化大豆品系奠定基础。