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藏系绵羊长期生活在高原地区,具有较强的抗病性和适应性。目的:本研究旨在发掘藏系绵羊抗病免疫基因,以期为藏系绵羊抗病性的研究提供前期基础。方法:本研究以小尾寒羊为对照,通过RNA-Seq技术分别对高原型和欧拉型藏羊进行抗病免疫基因转录组学差异表达分析,Real-Time PCR进行功能验证。结果:(1)欧拉型藏羊与小尾寒羊比较,RNA-Seq测序结果表明,欧拉型藏羊相对于小尾寒羊有253个基因表达差异显著,其中104个基因显著上调,149个基因显著下调,GO富集分析结果显示,差异基因富集在多细胞生物过程和细胞表面受体信号通路等功能类别中,KEGG富集分析显示,表达上调的基因富集较为显著的通路有移植物抗宿主病、TGF-bate信号通路、BCR信号通路和同种异体排斥反应等,其中,参与BCR信号通路的CD19和CD79B基因、参与IgA肠道免疫网络的TNFRSF13B和TNFRSF13C基因以及HIF-1信号通路的EGLN3基因均呈现表达上调。(2)高原型藏羊与小尾寒羊比较,RNA-Seq测序结果表明,高原型藏羊相对于小尾寒羊共有280个基因表达差异显著,其中104个基因显著上调,176个基因显著下调。GO富集结果表明,高原型藏羊和小尾寒羊的差异基因富集在2945个GO功能类别中,其中,上调基因主要富集在免疫应答和免疫系统过程。KEGG富集结果表明,上调基因富集较为显著的通路有TCR信号通路、吞噬泡、细胞黏附分子、抗原加工和呈递等,其中,参与TCR信号通路的基因有Vav1、GRAP2、CD3D、CD3G和CD3E,这些基因均表达上调分别编码原癌基因、GRB2相关衔接蛋白2以及T细胞表面糖蛋白CD3δ、γ、ε链,与趋化因子相关的基因Vav1、CCL3和CCL16表达上调,分别编码原癌基因和CC基序趋化因子3、16。相对于小尾寒羊,分别随机筛选高原型藏羊和欧拉型藏羊表达差异显著上调和下调基因各5个,进行Real-Time PCR检测,结果发现差异表达趋势与RNA-Seq结果一致。结论:欧拉型藏羊相对于小尾寒羊有253个基因表达差异显著,其中CD19、CD79B、TNFRSF13B、TNFRSF13C和EGLN3等基因在欧拉型藏羊脾脏组织中呈现上调表达;高原型藏羊相对于小尾寒羊共有280个基因表达差异显著,其中Vav1、GRAP2、CD3D、CD3G、CD3E、CCL3和CCL16等基因在高原型藏羊机体免疫系统中均呈现上调表达。研究结果将为藏系绵羊抗病分子机制的深入研究提供前期基础。