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钙调磷酸酶(Calcineurin,CN)是目前所知唯一依赖Ca<2+>/CaM的ser/thr蛋白磷酸酶.该酶由A、B二亚基以1:1的比例组成异二聚体,A亚基(CNA)是催化亚基;B亚基(CNB)是调节亚基,能促进CNA的活性,且分子量小,性质稳定.生物学功能研究表明CNB能明显抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠的生存期.细胞学实验发现CNB能刺激T细胞增殖,促进NK细胞活性等.由此确定了CNB作为抗肿瘤药物的良好前景.为了开发应用CNB,该室已构建了CNB的基因工程表达系统,在大肠杆菌中得到表达.并在实验室研究的基础上,已进行了表达rhCNB的中试发酵工艺研究和纯化方面的探讨.表达量可达到700mg/L以上,rhCNB纯度可达到95％以上.在此基础上该文进行了以下两方面工作的研究:1、为了达到生物制品的质量标准,进一步改进了rhCNB的纯化工艺.在原流程的基础上,增加了DEAE Sepharose FF,以达到除热源、并进一步纯化的目的.纯化的样品达到了PAGE电泳银染一条带的纯度,纯度用HPCE和RP-HPLC检测达到了98％以上,回收率在40％左右,热源测定基本合格.使rhCNB能够达到基因工程药物的要求,为rhCNB的产业化奠定了基础.2、为了能够对rhCNB进行有效的质量控制,该文对制备的三批注射用rhCNB进行了分子结构确证与理化特性鉴定,结果我们表达的重组hCNB与天然hCNB的结构完全一致.从而确定基因工程上游和下游处理过程中未发生差错,重组产物不存在后转译化学修饰及未预期氨基酸的变异等,工艺过程也较稳定.该文建立了rhCNB的毛细管区带电泳纯度测定新方法,能够将rhCNB与未知杂质有效分离,其测定结果与反相高效液相色谱法(RP-HPLC)基本一致.此方法与传统的SDS-PAGE电泳相比具有高效、快速、简便及样品和试剂消耗少等优点.可作为rhCNB的质控方法,并可用于纯化过程中中间产品的质量监测.该文采用动态浊度法,对注射用rhCNB进行了细菌内毒素定量检查方法的研究,探讨以细菌内毒素定量检查法取代家兔热原检查法的可行性.通过对三批rhCNB进行干扰试验,发现rhCNB在20倍稀释后可以消除干扰作用,能够进行细菌内毒素定量检查方法的检测,因此建立了rhCNB细菌内毒素定量检查的新方法,该方法简便、快速、准确.用此法取代家兔法对rhCNB进行细菌内毒素的质量控制是可行的.该文采用HPCE、RP-HPLC、SDS-PAGE、Bradford法、CD光谱、pH值、生物学活性等检测方法对rhCNB的稳定性进行系统研究.在贮藏温度条件下检测其稳定性,结果rhCNB于2-8℃保存24个月,外观、pH、蛋白含量、纯度、肽图谱、CD光谱、及生物学活性均无太大变化,其性质较稳定,有效期可暂定为两年.