草莓抗炭疽病遗传图谱构建和抗性相关基因的克隆与表达分析

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fuyunyang1
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草莓炭疽病是由半支菌亚门炭疽菌属(Colletotrichu)引起的病害,可为害草莓植株大部分器官,发病后能够造成巨大损失。充分挖掘抗病基因资源,利用分子辅助育种方法,选育出抗病品种,是解决炭疽病发生的有效途径。本研究从两个方面着手,寻找与炭疽病相关基因,为抗病遗传育种提供帮助。一方面寻找与草莓炭疽病密切相关的分子标记,构建高密度与抗病相关的遗传连锁图。本研究以易感草莓炭疽病品种宝交早生(Hokowase)与高抗草莓炭疽病品种甜查理(Sweet Charlie)杂交的210个F2代群体材料为作图群体,构建了包含34个AFLP标记和109个SSR标记的分子遗传图谱,并对抗草莓炭疽病相关因素进行了QTL分析。该图谱共包括7个连锁群和133个遗传标记,平均每个连锁群有19个遗传标记。遗传图谱总覆盖长度为451.8cM,标记间平均距离为3.4cM。经复合区间作图法分析得到3个与草莓炭疽病抗性相关基因座(QTL),其中2个与Colletotrichum acutatum抗性相关,分布在LG3和LG5连锁群上,可解释表型变异的31.6%;1个与Colletotrichum gloeosporioides抗性相关,分布在LG6连锁群上,可解释表型变异的68.4%。遗传连锁群LG3、LG5和LG6上存在QTL聚集区。另一方面克隆抗性相关基因。NBS-LRR类型的基因是植物最重要的抗病基因家族,在草莓中存在大量NBS-LRR类基因。本研究利用生物信息学方法分析草莓基因组中相关抗性基因的结构与功能,为该抗病基因的分子进化提供一些佐证。利用森林草莓全基因组数据库,输入保守域序列,得到93个NBS-LRR基因,克隆得到36个对36个候选抗病基因进行ORF分析,其中28个基因能够连续通读,8个含有终止子草莓炭疽菌接种草莓后,选取了3个时间点分析了16个NBS-LRR基因表达情况。荧光定量PCR证实,有15个基因表达量发生变化,其中2个基因上调表达,其余则下调表达。
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