【摘 要】
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为了解广东省大量饲养鸡主要品种白细胞介素-18(Chicken Interleukin-18,ChIL-18)全基因序列,该研究应用RT-PCR技术,参照国外己发表的ChIL-18基因序列,自行设计1对引物,以PHA
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为了解广东省大量饲养鸡主要品种白细胞介素-18(Chicken Interleukin-18,ChIL-18)全基因序列,该研究应用RT-PCR技术,参照国外己发表的ChIL-18基因序列,自行设计1对引物,以PHA活化的35日龄江西土鸡、新兴黄鸡、岭南黄鸡及乌鸡的脾淋巴细胞中提取的总RNA为模板,均扩增出大小约600bp的基因片段.分别将扩增产物进行T-A克隆,经PCR、酶切鉴定及DNA测序验证,成功获得了4个品种ChIL-18全基因克隆,并对其克隆进行了序列测定.该实验探索ChIL-18基因重组真核表达质粒pChIL-18直接注射鸡体内,转染、表达对灭活疫苗的佐剂作用,以及提高正常鸡体抗感染力的作用.应用第三章构建的ChIL-18基因真核表达质粒pChIL-18,单独或与ND灭活疫苗联合注射健康鸡体,注射后连续观察8周,每周检测鸡的T细胞转化情况,和ND的HI抗体水平,第8周则进行NDV强毒攻击.结果表明1、pChIL-18单独注射后与对照组相比,从第3周开始,鸡体的T细胞转化显著上升,第5周达到高峰,到第8周仍维持高的水平;第8周攻毒有3/8存活(对照组8/8死亡),2、pChIL-18与NDV灭活疫苗联合注射组与单独接种NDV灭活疫苗组对比,ND的HI抗体水平没有明显差异,但鸡T细胞转化明显增高,攻毒后两组均8/8保护,3、凡注射pChIL-18的鸡连续观察8周未见异常反应,扑杀鸡,检查脾脏、胸腺、法氏囊等器官也未见异常.试验结果综合表明重组真核表达质粒pChIL-18直接注射,对健康鸡有增强抗ND感染的能力;可提高ND灭活疫苗的细胞免疫效应.
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