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苏丹红I(C.I.no.12055)属于亲脂性偶氮化合物,是一种人工合成的工业红色染料,动物毒理学研究证明其具有毒性和致癌性,因此被各国明文禁止作为食品添加剂。但由于苏丹红I着色效果好,价格低廉等优点,仍有商家将其用于食品着色。然而目前关于苏丹红毒性的大部分研究均基于动物细胞和染色体水平,并且在人体毒理方面的研究工作甚少。因此,苏丹红I的人体毒理学研究及其监控得到国内外的广泛关注,成为环境毒理学研究的热点问题之一。基因芯片因其具有能在转录水平高通量、大规模、平行地处理大量基因的优点,为环境毒理基因组研究提供了有力的工具。尤其是近来人类全基因组芯片技术的出现,使全面、综合分析某些生命现象成为可能。本课题采用了人类全基因组芯片技术,分析苏丹红I对人外周血淋巴细胞的基因表达影响,探索其对人体的毒性和致癌作用。
采用MTT检测技术,观察不同浓度苏丹红I溶液对人外周血淋巴细胞生长的影响。结果显示,随着苏丹红I浓度的增加,体外抑制率增大;绘制生长抑制曲线,得到半数抑制浓度IC<,50>(50%inhibitory concentrations,IC<,50>),浓度为8.O×10<-3>mol/L。
使用IC<,50>浓度的苏丹红I溶液处理淋巴细胞,分别提取和纯化处理组及对照组淋巴细胞总RNA,并使用Cy5和Cy3分别对其进行荧光标记,混合后与美国西北大学研制的人类全基因组芯片(34,995个点)进行杂交。对杂交后芯片进行扫描和数据提取,采用总荧光强度标准化方法(TIN)对数据进行标准化,筛选出差异表达基因,并使用ABI Panther在线分析工具对其进行分类分析。结果显示,筛选出的487个差异表达基因中,306个基因表达上调,181个基因表达下调。差异表达基因主要包括癌基因,与细胞信号传导、细胞增殖、循环、分化与凋亡、免疫与防御以及氧化代谢有关的基因等。FGFR、MYB、BIRC3等基因的差异表达,提示苏丹红I有诱发人类肝脏和膀胱等肿瘤的倾向。基于CYPlAl等差异基因的分析,初步对苏丹红I急性毒性暴露的生物标志进行了探讨。
本研究采用基因芯片技术探索了苏丹红I对人体的毒性和致癌作用,不仅提供了一条研究苏丹红I的人体毒性和致癌性和确定苏丹红I人体暴露的生物学标志行之有效的新途径,还体现了基因芯片技术的可行性和优越性。