苦皮藤BAHD酰基转移酶的功能鉴定及异源表达

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在植物的次级代谢中,酰基化是一种广泛存在的修饰步骤,可增加次级代谢产物的结构多样性,提高化合物的稳定性、脂溶性以及改善生物利用度。酯类是植物中最常见的酰基化产物,其中脂肪烃、生物碱、木质素单体、萜类和芳香醇类等多种代谢物的酯化皆由BAHD酰基转移酶催化完成。BAHD酰基转移酶以该家族中四种类型的酶英文首字母命名,以酰基Co A作为供体分子,醇或氨基作为酰基受体,催化形成酯类或酰胺类化合物。在酯类及酰胺类的生物合成途径探索中,BAHD酰基转移酶的挖掘工作至关重要。本研究主要从苦皮藤转录组数据中筛选出35个注释为BAHD酰基转移酶的序列,对其做了基本的生物信息学分析,并选择其中10个BAHD酰基转移酶(Ca AT1-10)与6个不同来源的BAHD酰基转移酶(AT5G47980、Tri16、TBT、ATF1、SAAT和Li AAT-3),以不同类型的酰基供体与酰基受体进行功能鉴定实验,然后对具有酰基化活性的酰基转移酶进行体外酶学性质研究与体内酵母表达。实验结果表明,Ca AT1、Ca AT9、Ca AT10、ATF1、SAAT和Li AAT-3,这6个酶能够催化部分短链的脂肪醇(戊醇、正辛醇等)、芳香醇(苯甲醇、2-苯乙醇等)以及直链单萜醇(香叶醇、薰衣草醇等)形成挥发酯类产物。序列分析及酶活检测结果表明,BAHD酰基转移酶的DFGWG保守序列,对部分酰基转移酶的活性影响较小。酶学性质分析结果表明,Ca AT1、Ca AT9和Ca AT10对苯甲酰Co A具有更高的亲和性,而ATF1、SAAT和Li AAT-3更偏爱乙酰或异丁酰Co A。酰基转移酶酵母表达实验结果表明,SAAT和Li AAT-3具有较高的催化活性,可用于挥发酯类的生物合成。本文通过对BAHD酰基转移酶的体外功能鉴定、酶学性质分析及体内酵母表达,完善了BAHD酰基转移酶的功能研究,为酯类的生物合成奠定了基础。
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