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目的：人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)的广泛传播已经严重影响到人类特别是儿童的生命健康。本课题旨在研究HBoV1和HBoV2的病毒蛋白2(viral protein2,VP2)病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)的免疫原性,及免疫途径和免疫佐剂对病毒样颗粒免疫原性的影响,探讨HBoV VP2VLPs作为疫苗的可能性。方法：通过重组杆状病毒感染草地夜蛾细胞(Spodoptera Frugiperda9.SF9)表达HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs,经氯化铯(Cesium Chloride,CsC1)不连续密度梯度离心纯化获得高纯度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs。分别于实验第0、3、6w用15μg HBoV1VP2VLPs或HBoV2VP2VLPs加或者未加明矾佐剂,通过肌内注射(intramuscular injection, IM)或皮内注射(intracutaneous injection,ID)途径免疫小鼠,实验第8w收集小鼠血清及脾脏淋巴组织。探索酶联免疫斑点试验(Enzyme-linked immunospot, ELISPOT)检测HBoV VP2VLPs诱导特异性细胞免疫反应最佳实验条件,并检测HBoV VP2VLPs诱导的特异性细胞免疫反应强度；采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测血清特异性IgG抗体效价,综合评价HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs的免疫原性。从细胞免疫反应强度、IgG抗体效价与IgG抗体活性三方面,分析免疫途径和免疫佐剂对其免疫原性的影响,寻找最佳的免疫途径和免疫佐剂,并探讨HBoV1和HBoV2免疫血清的交叉反应。结果：1、多肽P3(GYIPIENEL)及P5(LYQMPFFLL)为HBoV1特异性T细胞表位,P8(GYIPVIHEL)为HBoV2特异性T细胞表位；2、检测HBoV VP2VLPs诱导特异性细胞免疫反应的ELISPOT的最佳实验条件为：培养时间为24h,小鼠脾脏淋巴细胞浓度为5×105细胞/孔,特异性刺激多肽浓度为10μg/ml；3、在特异性多肽的刺激下,HBoVl实验组特异性分泌IFN-y的细胞数为(178+53)/106细胞,HBoV2实验组特异性分泌IFN-y的细胞数为(156+50)/106细胞,与对照组比较两者差异均有统计学意义(p<0.001)4、HBoV VP2VLPs诱导机体产生高效价特异性IgG抗体(HBoV1实验组1:620000, HBoV2实验组1：380000)。同样剂量的HBoV1VP2VLPs免疫后小鼠血清IgG效价高于HBoV2VP2VLPs免疫后小鼠血清|gG效价p<0.01)；HBoV1VP2VLPs免疫血清IgG活性系数为(58+12)%,HBoV2VP2VLPs免疫血清IgG活性系数为(62+7)%,均大于50%,两者之间无显著性差异(p>0.05)；5. HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs通过肌内注射或皮内注射免疫诱导的特异性细胞免疫反应强度、血清IgG效价和IgG活性均无显著性差异(p>0.05)；6、明矾佐剂降低HBoV VP2VLPs诱导细胞免疫反应强度(p<0.001),增强HBoV VP2VLPs诱导的血清IgG效价(p<0.05)和IgG活性p<0.01)。结论：1、成功获得高纯度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs;2、首次获得2条HBoV1小鼠特异性T细胞表位多肽和1条HBoV2小鼠特异性T细胞表位多肽,并确定ELISPOT检测人博卡病毒VP2病毒样颗粒诱导特异性细胞免疫反应最佳实验条件；3、HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs能诱导机体产生强烈的体液免疫反应和细胞免疫反应,具有很好的免疫原性,可用于疫苗的研究；4、肌内注射和皮内注射途径对HBoV VP2VLPs免疫原性无影响,肌内注射更便捷；5、明矾佐剂使HBoV VP2VLPs诱导的体液免疫反应增强,使HBoV VP2VLPs诱导的细胞免疫反应减弱。HBoV VP2VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂,作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。