论文部分内容阅读
E1AF,鼠PEA3的人的同源物,属于ETS转录因子家族PEA3亚家族,具有保守的ETS结构域,通过结合靶基因启动子区域的Ets结合位点(EBS)调控转录。E1AF除了参与生理过程如乳腺发育外还参与了肿瘤的发生和转移。在尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)中,E1AF基因易位后可以导致E1AF和EWS发生融合,从而导致尤文氏肉瘤的原癌发生。在乳腺癌中,E1AF在HER2/Neu介导的乳腺癌发生中起重要的作用,另外,E1AF可直接与肿瘤迁移和侵袭相关性基因的启动子区域结合,参与肝细胞生长因子(HGF)诱导的肿瘤侵袭和转移。这两项以往的研究成果说明E1AF与肿瘤的发生及侵袭是密切相关的。但是E1AF在肿瘤里是否还存在其他的功能是我们所关心的内容。我们的研究发现:E1AF在肿瘤细胞里具有促凋亡作用。具体而言,首先,我们发现,在光辉霉素诱导的肝癌细胞系Huh-7和Hep3B凋亡的过程中,E1AF的蛋白表达水平明显上调。接着,我们在Huh-7细胞里过表达E1AF发现,E1AF的过表达能明显促进光辉霉素诱导的Huh-7细胞的凋亡。Bcl-2家族成员由于其在细胞凋亡中的重要作用而广为人知。Bax是Bcl-2家族中的一员,起促凋亡作用。有研究表明,Bcl-2和Bax的蛋白比例有可能决定了细胞是否进入凋亡过程。进一步深入的研究E1AF诱导肿瘤细胞凋亡的机制发现,过表达E1AF可上调Bax和caspase-3的表达。说明E1AF有可能是通过改变Bcl-2和Bax的比例增强肿瘤细胞对光辉霉素的敏感性。E1AF具有一个功能性的酸性结构域(AD),富含谷氨酰胺结构域(Gln-rich domain),DNA结合的ETS结构域。为了进一步阐明E1AF哪个结构域在其促凋亡过程中起了关键性作用,我们构建一系列GFP标记的E1AF结构域缺失突变体,结果发现ETS结构域对于E1AF的促凋亡作用是至关重要的。除此之外,我们在H1299细胞里发现E1AF参与了E2F1和DNA损伤剂共同诱导的细胞凋亡过程。我们的实验结果进一步证实了E1AF的促凋亡作用,并且E2F1在转录水平上调控E1AF的表达。综上所述,我们首次发现了E1AF的促凋亡作用,并且证明了E1AF的促进光辉霉素诱导的细胞凋亡是通过促凋亡蛋白Bax起作用的,这种促凋亡作用依赖其ETS结构域。E1AF在E2F1和DNA损伤剂诱导的肿瘤细胞凋亡中也起了重要作用。