【摘 要】
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双酚A（BPA）是一种化工材料,广泛应用于生产各种塑料制品,是公认的环境内分泌干扰物,具有生殖毒性,可蓄积在卵巢诱导氧化应激和细胞凋亡,引起卵巢损伤。益生菌是天然微生物,具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤和调节肠道菌群以及生殖保护作用,能有效防治多种疾病。有相关研究表明,复合益生菌对BPA导致的卵巢损伤具有保护作用,但其作用机制尚不明确。本研究以嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母和粪肠球菌四种菌组合而
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双酚A（BPA）是一种化工材料,广泛应用于生产各种塑料制品,是公认的环境内分泌干扰物,具有生殖毒性,可蓄积在卵巢诱导氧化应激和细胞凋亡,引起卵巢损伤。益生菌是天然微生物,具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤和调节肠道菌群以及生殖保护作用,能有效防治多种疾病。有相关研究表明,复合益生菌对BPA导致的卵巢损伤具有保护作用,但其作用机制尚不明确。本研究以嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母和粪肠球菌四种菌组合而成的复合益生菌（P）作为干预药物,探究其对BPA诱导的青春期雌性ICR小鼠卵巢损伤的保护作用,本实验从以下两方面开展研究:（1）BPA中毒试验:将小鼠暴露于剂量梯度1mg/kg/d、5 mg/kg/d和10 mg/kg/d的BPA 28 d,通过检测小鼠体重、卵巢重量及系数、卵巢功能关键指标（血清激素E2、P4和FSH含量）、氧化应激（ROS含量和SOD活性）、细胞凋亡关键因子（Bax和Bcl-2蛋白表达）,探明BPA致小鼠卵巢损伤的剂量效应关系,筛选出小鼠卵巢损伤和细胞凋亡均显著发生的最小剂量,作为后续复合益生菌干预试验所用BPA适宜剂量;（2）复合益生菌干预试验:以上述筛选的BPA剂量与复合益生菌4×10~9 CFU/d剂量联合处理4周龄SPF级ICR小鼠,随机分为4组,每组20只,设置对照组（CG）:（玉米油+玉米油）;中毒组（BG）:（玉米油+5 mg/kg BPA）;干预组（BPG）:（5 mg/kg BPA+4×10~9CFU P）;复合益生菌组（PG）:（4×10~9 CFU P+玉米油）;每天上午8时（复合益生菌、玉米油）和10时（BPA、玉米油）对四组小鼠分别进行灌胃,连续灌胃28 d。检测小鼠体重、卵巢重量及系数、卵巢显微结构、卵巢功能关键指标（血清激素E2、P4和FSH含量）、氧化应激（ROS、MDA和GSH含量以及SOD、CAT活性）、细胞凋亡关键指标（Bcl-2、Bax、P53、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达）及Nrf2信号通路相关基因及蛋白（Nrf2胞核、胞质蛋白和Keap1蛋白以及Nrf2、NQO1、CAT、SOD、GSS、GCLC和GCLM基因及蛋白表达）,旨在评估复合益生菌对BPA致青春期小鼠卵巢损伤的保护作用。试验结果如下:BPA中毒试验结果如下:（1）与CG相比,MBG和HBG小鼠体重逐渐降低（P＜0.01）,卵巢重量逐渐降低（P＜0.01）;LBG、MBG和HBG小鼠血清E2含量逐渐升高（P＜0.01）,血清P4和FSH含量逐渐降低（P＜0.01）;表明BPA可导致小鼠卵巢功能损伤。（2）与CG相比,LBG、MBG和HBG小鼠卵巢组织ROS含量逐渐升高（P＜0.01）,SOD活性逐渐降低（P＜0.01）,表明BPA可诱导小鼠卵巢组织氧化应激。（3）与CG相比,MBG和HBG小鼠卵巢组织Bax蛋白表达逐渐升高（P＜0.05;P＜0.01）,而Bcl-2蛋白表达逐渐降低（P＜0.05;P＜0.01）,表明BPA可诱导小鼠卵巢组织细胞凋亡。复合益生菌干预试验结果如下:（1）复合益生菌干预显著缓解BPA诱导的小鼠体重及卵巢重量显著下降（P＜0.01）,卵巢组织内裂隙,颗粒细胞层破损,界限模糊等结构损伤,血清激素E2含量的升高（P＜0.01）,P4、FSH含量的降低（P＜0.01）;表明复合益生菌能够缓解BPA诱导的卵巢损伤。（2）复合益生菌干预显著提高BPA诱导的小鼠卵巢GSH含量、SOD和CAT活性（P＜0.01）,显著降低MDA和ROS含量（P＜0.01）,表明复合益生菌能够缓解BPA暴露引起的小鼠卵巢氧化应激状态。（3）TUNEL染色显示,复合益生菌干预显著缓解BPA诱导的小鼠卵巢组织内细胞凋亡现象;复合益生菌干预显著提高BPA诱导的小鼠卵巢组织Bcl-2蛋白表达（P＜0.01）,显著降低Bax、P53、Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达（P＜0.01）,表明复合益生菌可缓解BPA暴露引起的卵巢组织细胞凋亡。（4）复合益生菌干预显著提高BPA诱导的小鼠卵巢Nrf2基因表达量,增加胞核和胞质Nrf2蛋白以及Keap1蛋白含量（P＜0.01）;同时显著提高Nrf2下游NQO1、CAT、SOD、GSS、GCLC和GCLM基因及蛋白表达（P＜0.01）;表明复合益生菌可激活Nrf2信号通路,上调卵巢组织抗氧化酶的表达,缓解BPA对抗氧化系统的抑制作用。结论:复合益生菌可有效缓解BPA诱导的小鼠卵巢损伤,且与氧化应激和细胞凋亡的缓解以及Nrf2信号通路的激活有关。
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